Анализ динамики кальция и изменений мембранного потенциала в эндотелии артериол мыши

Закрепите артериолярную эндотелиальную трубку, собранную из мозга мыши, в камере с непрерывным буферным потоком.

Поместите камеру в записывающую установку.

Введите чувствительный к кальцию флуоресцентный краситель. Инкубируйте, чтобы дать возможность клеткам усвоить краситель.

Умойтесь, чтобы удалить любой невнутренний краситель.

Вставьте электрод в эндотелиальную клетку и зарегистрируйте потенциал мембраны покоя.

Увеличьте температуру ванны до физиологической температуры, чтобы облегчить внутриклеточное связывание кальция с красителем.

Возбуждайте краситель и измеряйте флуоресценцию для количественного определения исходного уровня кальция в клетках.

Введите препарат, который связывается со специфическими рецепторами, связанными с G-белком, на эндотелиальных клетках, инициируя сигнальный каскад

.

Этот каскад высвобождает ионы кальция из эндоплазматического ретикулума в цитоплазму, усиливая связывание кальция с красителем и флуоресценцию.

Повышенный уровень кальция в цитоплазме также активирует калиевые каналы, способствуя оттоку ионов калия и уменьшая мембранный потенциал.

Запишите данные.

Повышенная флуоресценция и снижение мембранного потенциала указывают на функциональную эндотелиальную тр