Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 7:03 мин. • April 28th, 2025
Возьмем клетки нейросферы в буфере, содержащем детергенты, кальций и ингибиторы протеазы.
Детергент проникает в клетки, в то время как ингибитор инактивирует протеазы, сохраняя связанный с хроматином целевой белок.
Добавьте нуклеазу и инкубируйте. Нуклеаза использует кальций для переваривания хроматина.
Добавьте ЭДТА-содержащий буфер, который хелатирует кальций, инактивируя нуклеазу.
Добавьте буфер для лизиса для лизиса клеток, высвобождая хроматин.
Центрифугируйте и соберите надосадочную жидкость.
Добавьте антитела, специфичные к белку-мишени, и инкубируйте с вращением. Центрифугируйте и удалите надосадочную жидкость.
Введите магнитные шарики, нацеленные на антитело, и инкубируйте с вращением.
Добавьте буфер для лизиса для отделения неспецифически связанной ДНК.
Магнитом захватите шарики и удалите надосадочную жидкость.
Добавьте буфер с высоким содержанием соли для отделения неспецифически связанных белков.
Магнитом захватите шарики и удалите надосадочную жидкость.
Добавьте буфер стабилизации, магнитно захватите шарики и удалите загрязнения.
Ресуспендируйте в буфере протеиназы-К для переваривания белков, высвобождая ДНК.
Как только нейросферы будут собраны, центрифугируйте 1 раз по 10 до 6 кл
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео