Иммуноокрашивание нейронов в срезах мозга мышей после флуоресцентной гибридизации in situ

Возьмите фиксированные и пермеабилизированные срезы мозга мыши, содержащие нейроны, включая холинергические нейроны, экспрессирующие холинацетилтрансферазу.

Срезы подвергаются флуоресцентной гибридизации in situ для обнаружения целевых мРНК, локализованных в холинергических аксонах, что приводит к усилению сигналов с помощью флуоресцентных зондов, которые обнаруживаются с помощью флуоресцентной микроскопии.

Добавьте блокирующий раствор, содержащий белки и гасящий агент. Белки предотвращают неспецифическое связывание, а закалочный агент нейтрализует остаточные фиксаторы.

Инкубируйте с первичными антителами, нацеленными на нейрональную холин-ацетилтрансферазу.

Промойте буфером, чтобы удалить несвязанные антитела.

Инкубируйте с фторофор-конъюгированными вторичными антителами, которые связываются с первичными антителами, связанными с холин-ацетилтрансферазой.

Промойте буфером, чтобы удалить излишки антител, затем промойте в дистиллированной воде, чтобы удалить остатки буфера.

Смонтируйте срезы с помощью монтажной среды, содержащей ядерное пятно, чтобы пометить ядра.

Используя флуоресцентную микроскопию, визуализируйте срезы, чтобы визуализировать целевые сигналы мРНК и холинергические аксоны,