Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 3:11 мин. • April 28th, 2025
Сделайте срез сетчатки мыши на сетке электронной микроскопии. Секция содержит ганглиозные клетки сетчатки, или РГК, синаптически связанные с биполярными клетками.
Пресинаптические биполярные клетки содержат нейротрансмиттные везикулы, расположенные в виде ленты вблизи синаптической мембраны.
Постсинаптические РГК отображают на своей мембране кластерные нейротрансмиттеры. Эти клетки помечены субъединицей холерного токсина B или CTB.
Промойте буфером для поддержания pH.
Инкубируйте с блокирующим буфером для маскировки неспецифических сайтов связывания.
Инкубируйте с первичными антителами, нацеленными на рецепторы нейротрансмиттеров и СТБ.
Промойте буфером, чтобы удалить несвязанные антитела и поддерживать pH.
Инкубируйте с вторичными антителами, конъюгированными с наночастицами золота разного размера, которые связываются с первичными антителами, мечая молекулы-мишени.
Удалите несвязанные антитела, затем высушите образец на воздухе.
Нанесите тяжелые металлы, которые связывают макромолекулы, усиливая контраст.
С помощью электронной микроскопии можно идентифицировать РГК с помощью меченых НТБ и найти меченые рецепторы нейротрансмиттеров.
На этом этапе ультратонкие срезы толщиной 70 нанометров
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео