Мониторинг активации рецепторов запаха в рекомбинантных клетках в режиме реального времени

Начните с многолуночной пластины, содержащей адгезивные рекомбинантные клетки млекопитающих в растворе для стимуляции, дополненном люциферином, люминесцентным субстратом.

Incubate, чтобы разрешить проникновение люциферина в клетку.

Эти клетки экспрессируют мембранно-связанные рецепторы запаха в сочетании с обонятельными G-белками и рецепторно-транспортными белками.

Кроме того, клетки экспрессируют цитоплазматические белки Glosensor, люминесцентные белки, чувствительные к циклическому АМФ.

<p style='margin-left:36pt; text-align:justify; >Добавьте испаряемый раствор одоранта в пространство между лунками и поместите пластину в люминометрик, предварительно уравновешенный тем же одорантом.

Инициируйте измерение люминесценции.

Молекулы запаха связываются с рецепторами запаха клеток, активируя связанный G-белок и диссоциируя α субъединицу G-белка, или Gα.

Диссоциированная субъединица Gα связывается с ферментом аденилатциклазы, встроенным в мембрану, активируя его. Активированный фермент преобразует АТФ в циклические АМП.

Эти циклические АМФ связываются с глосенсорными белками, изменяя их конформацию и обеспечивая связывание люциферина.

Это взаимодействие вызывает люминесценцию, подтверждающую