Моделирование регенерации сенсорных аксонов у крысы с помощью инъекции ганглия дорсального корешка и травмы дробления дорсального корешка

Начните с крысы под наркозом.

Сделайте разрез кожи по средней линии между шейным позвонком С2 и грудным позвонком Т2.

Далее надрежьте вдоль средней линии белой фиброзной ткани и втяните первый мышечный слой.

Рассеките тонкую пленчатую ткань по средней линии второго мышечного слоя, затем втяните поперечно-полосатые продольные мышцы.

Наконец, разрежьте третий слой мышц, чтобы обнажить позвоночный столб.

Удалите пластинку и ножку, расположенные над левыми позвонками от C4 до T1, чтобы выявить ганглии дорсальных корешков C5-C8 или DRG.

Ввести рекомбинантную аденоассоциированную вирусную суспензию в ДРГ.

Вирус кодирует белок, способствующий росту, который способствует регенерации аксонов.

С помощью щипцов раздавите дорсальные корешки от C5 до C8, чтобы разорвать аксональные связи от DRG к спинному мозгу, создавая контролируемую аксональную травму.

Модель готова к изучению вирус-опосредованной аксональной регенерации.

Начните операцию с обнаружения выступающих С2 и Т2 остистых отростков на коже. Затем с помощью скальпеля под номером 10 сделать разрез кожи между С2 и Т2 остистыми отростками. Как только кожа будет открыта, на первом слое мышцы должна быть видна средняя линия белой фиброзной ткани, которая имеет желеобразную текстуру.

Сделайте разрез аналогичного размера на первом слое мышцы по белой средней линии. Не стоит выходить за пределы выступающего Т2 остистого отростка, так как рядом с ним расположен крупный кровеносный сосуд. Втяните первый слой мышцы с помощью двух ретракторов, один из которых расположен рострально, а другой каудально.

Теперь должен быть виден второй слой мышц с бороздчатым видом. Расположите среднюю линию второго слоя мышцы, где можно наблюдать две продольные мышцы, соединенные тонкой мембранной тканью. Затем с помощью микроножниц рассеките перепончатую ткань и разделите две продольные мышцы.

Отрегулируйте ретракторы, чтобы обнажить третий слой тонкой мордочки, покрывающей позвоночник. Остистые отростки можно прощупать, слегка прикоснувшись щипцами к третьему слою мышцы. С помощью микроножниц сделайте небольшой разрез на третьем слое мышцы. И аккуратно соскребите мышцу с кости с помощью кюретки или скальпеля сбоку, чтобы четко обнажить позвонки.

Чтобы обнажить левый DRG от C5 до C8, используйте пару тонких ронжеров для выполнения левой гемиламинектомии на позвонках C4-T1, осторожно удалив часть пластинки и ножки. После того, как достаточное количество DRG будет подвергнуто воздействию для инъекции, подготовьте шприц, поместив заполненный вирусом микролитровый шприц, оснащенный изготовленной на заказ тупой иглой 33-го калибра, на стереотаксический держатель шприца. Затем с помощью скошенной иглы 30-го калибра сделайте небольшое поверхностное отверстие на каждой из целевых DRG, чтобы облегчить введение инъекционной иглы. Аккуратно отрегулируйте стереотаксические координаты, чтобы вставить стрелку 33-го калибра в центр ДРГ.

В идеале игла должна быть размещена в самом центре ДРГ, чтобы обеспечить равномерную диффузию вводимого раствора по всей ДРГ.

После того, как игла будет введена, используйте насос для инфузионного шприца, чтобы ввести 1 микролитр вируса в каждую DRG. Во время инъекции ДРГ будет медленно менять цвет, если раствор вируса содержит цветной краситель. Не переусердствуйте с введением иглы, так как это может привести к утечке жидкости с подфюзеляжной стороны DRG.

Если во время инъекции произошла утечка, немедленно отрегулируйте положение иглы. Через три минуты после окончания инъекции извлеките иглу для инъекций. Чтобы выполнить одновременную травму дорсального корешка от C5 до C8, раздавите каждый корень три раза в течение 10 секунд с помощью пары щипцов с тонкими наконечниками. Полностью противопоставьте концы щипцов. В месте раздавливания в ткани должна появиться белая линия.