Оценка целостности гематоэнцефалического барьера на модели крысы с лазерно-индуцированным повреждением головного мозга

Возьмем контрольную крысу под наркозом и модель крысы с лазерной травмой мозга.

Применение лазера на правом полушарии повреждает клетки и гематоэнцефалический барьер, или ГЭБ, который отделяет кровь от мозговой ткани.

Введите отслеживающий краситель в канюлированную хвостовую вену, которая проходит через системный кровоток и достигает мозга.

Краситель связывается с белками плазмы и проникает в ткани мозга через поврежденный ГЭБ.

Усыпьте крыс.

Проведите крыс через сердце, чтобы удалить краситель из циркуляции.

Извлеките и разрежьте мозг, изолируйте срезы от поврежденного полушария и гомогенизируйте их.

Обработайте кислотным раствором, чтобы денатурировать белки, высвобождая краситель, связанный с белками.

Центрифугируйте и изолируйте надосадочную жидкость, содержащую краситель. Добавьте спирт для усиления флуоресценции красителя.

Перенесите раствор на микропланшет. При возбуждении более высокая интенсивность флуоресценции в поврежденном мозге указывает на повреждение ГЭБ, вызванное лазером.

Чтобы оценить частоту разрыва гематоэнцефалического барьера, через 24 часа после лазерной травмы загрузите в шприц 2% синий краситель Эванса, разведенный в 4 миллилитрах на килограмм физиологического рас