Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 4:15 мин. • April 28th, 2025
Возьмите камерный слайд, содержащий монослойную культуру микрососудистых эндотелиальных клеток мозга крысы, или RBMECs, имитирующую слой эндотелиальных клеток гематоэнцефалического барьера.
Клетки демонстрируют разрушенные плотные соединения белков и волокна актинового стресса из-за стресса от кислородно-глюкозного голодания с последующей реоксигенацией.
Удалите среду и промойте клетки, нанесите фиксатор для сохранения архитектуры клеток, затем смойте излишки фиксатора.
Обработайте моющим средством для проникновения клеточных мембран.
Инкубируйте с блокирующим агентом для маскировки неспецифических сайтов связывания.
Чтобы пометить белки с плотным соединением, инкубируйте с определенными первичными антителами, затем удалите несвязанные антитела.
Инкубируйте с флуорофор-конъюгированными вторичными антителами, чтобы пометить первичные антитела.
В качестве альтернативы, чтобы пометить стрессовые волокна, добавьте фаллоидин, меченный флуорофорами.
Wash для удаления несвязанных маркирующих молекул.
Снимите камеру, нанесите на ядра красителя, содержащую флуоресцентный ДНК-связывающий краситель, затем запечатайте покровным стеклом.
Используя конфокальную микроскопию, визуализируйте флуоресцентно
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео