Модель минимального повреждения спинного мозга для изучения активации и миграции нейральных стволовых клеток

Возьми мышь под наркозом и побрей ей спину.

Закрепите его в стереотаксическом устройстве, с помощью свернутой марли, расположенной для поддержки грудного отдела позвоночника.

Продезинфицируйте кожу, сделайте вертикальный разрез по средней линии и втяните кожу.

Отделите мышечные сухожилия от грудного отдела позвоночника и втяните их.

Определите целевой позвонок, затем разрежьте межпозвоночные суставы, чтобы удалить его.

Обнажите спинной мозг и вставьте согнутую иглу по обе стороны от средней линии.

Введение иглы создает поверхностные повреждения в белом веществе, внешнем слое спинного мозга, содержащем пучки аксонов, оставляя центральный канал нетронутым.

Удалите иглу, затем зашите мышцы и кожу.

Поврежденные клетки испускают сигналы, которые активируют резидентные в тканях иммунные клетки, которые, в свою очередь, активируют нейральные стволовые клетки, или НСК, окружающие центральный канал.

Активированные NSC мигрируют к месту повреждения, способствуя восстановлению тканей.

Перед началом процедуры с помощью машинок для стрижки волос удалите шерсть со спины мыши, находящейся под наркозом, от середины спины до шеи и ушей. Закрепив мышь в стереотаксическом устройстве, поместите четыре-пять кусков свернутой марли под брюшную полость, при этом слегка потянув за основание хвоста, чтобы выпрямить тело и позвоночник.

Протолкните рулон грудной марли рострально от брюшка мыши к верхней части грудной клетки, чтобы поддержать грудной отдел позвоночника. И используйте лабораторную ленту, чтобы закрепить хвост и конечности в звездообразной ориентации. После дезинфекции открытых участков кожи последовательными тампонами из 70% этанола и повидон-йода с помощью лезвия скальпеля No 10 сделайте вертикальный разрез параллельно продольной оси животного, от середины обеих лопаток до изгиба грудного отдела позвоночника.

Втяните кожу, чтобы обнажить мягкие ткани и контур позвоночного столба, и определите нижнюю границу надлопаточного жирового пакета. Затем с помощью скальпеля аккуратно, но с усилием разрежьте вдоль обеих сторон костей позвонка от Т5 до Т8 и 9, чтобы отделить сухожилия задней мышцы от позвоночного столба. Переместите ретракторы так, чтобы зубы ретракторов были вставлены в место разреза по обе стороны от позвоночника, и расширьте каждый ретрактор, чтобы регулировать экспозицию до тех пор, пока позвоночник не станет достаточно высоким, не оказывая слишком большой нагрузки на втянутые мышечные слои.

Под хирургическим микроскопом тщательно очистите остаточные мышцы и другие мягкие ткани, лежащие над позвоночником, чтобы обнажить позвоночную кость, обхватив остистый отросток позвонков зубчатыми щипцами и слегка перемещая щипцы вверх и вниз, чтобы определить позвонки, которые будут удалены. Затем вставьте один кончик изогнутых тупых ножниц по обе стороны от открытого межпозвоночного отверстия, каудально по отношению к позвоночной пластинке, которую нужно иссечь, и разрежьте соединительные межпозвоночные суставы с обеих сторон. Затем поднимите пластинку вверх и отрежьте верхнее крепление пластинки, чтобы изолировать и удалить кость.

При отрезании и удалении пластинки позвонка следите за тем, чтобы ножницы всегда были наклонены вверх, чтобы не повредить подлежащий спинной мозг.

С помощью дорсальной срединной вены, служащей ориентиром, вставьте согнутый под углом 45 градусов стержень кончика иглы 30-го калибра скошенной стороной вверх, на 1 миллиметр вглубь дорсолатеральной поверхности спинного мозга и примерно на 0,5 миллиметра латерально по обе стороны от средней линии. Переместите иглу примерно на два миллиметра от каудального в ростральное направление, так, чтобы в шнур была введена вся длина скоса. Затем повторите траекторию входа, чтобы извлечь иглу.

Чтобы закрыть рану, удалите ретрактор и используйте рассасывающийся шов 6-0, чтобы соединить мышцы спины по обе стороны от раны по средней линии, и шелковый шов 4-0, чтобы закрыть вышележащую кожу.