Метод очистки гидрофобной ткани для образца ткани мозга крысы

Начните с образца ткани мозга, который непрозрачен из-за наличия пигментов и липидов. Эти компоненты вызывают рассеяние света в флуоресцентно меченых нейронах.

Последовательно инкубируйте ткань в растворах с возрастающей концентрацией метанола, чтобы удалить из нее воду и постепенно обезвоживать ткань.

Затем обработайте эту ткань концентрированным метанолом, чтобы удалить остаточную воду, обеспечивая полное обезвоживание.

Затем переведите ткань на первоначальный очищающий растворитель, содержащий дихлорметан и метанол.

Инкубируйте с легким встряхиванием, чтобы растворитель проник глубоко в ткань.

Дихлорметан удаляет пигменты и липиды из тканей, уменьшая рассеивание света и повышая прозрачность.

Наконец, переведите ткань на дибензиловый эфир, гидрофобный растворитель, и инкубируйте без встряхивания.

Растворитель действует как окончательный очищающий агент, который еще больше повышает прозрачность ткани.

Этот процесс улучшает проникновение света, позволяя более четко визуализировать меченые нейроны и их связи в тканях мозга образец.

Инкубируйте образец последовательно в 20%, 40%, 60%, 80% и 100% метаноле в течение одного часа при комнатной температуре. Затем инкубируйте его в свежем 100% метаноле на ночь. На следующий день инкубируйте образец в свежеприготовленном 66% DCM в 33% метаноле в течение трех часов при комнатной температуре с встряхиванием. Через три часа инкубируйте образец в дибензиловом эфире, не встряхивая, до тех пор, пока он не станет прозрачным. Затем храните его в дибензиловом эфире до проведения визуализации.