Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 5:41 мин. • April 28th, 2025
Начните с лечения нейронов гиппокампа мыши буфером с высоким содержанием калия, содержащим пероксидазу хрена или HRP.
Высокое содержание калия деполяризует пресинаптические нейроны, вызывая экзоцитоз синаптических везикул. Затем нейроны восстанавливают мембраны синаптических везикул через эндоцитоз, включая HRP в новообразованные везикулы. Зафиксируйте нейроны глутаровым альдегидом и промойте для удаления излишков глутарового альдегида.
Добавьте перекись водорода и хромогенный субстрат, который окисляется HRP с образованием электронно-плотных осадков. Промойте, чтобы удалить непрореагировавшую подложку.
Обработайте тетраоксидом осмия для улучшения контраста мембраны, затем смойте излишки реагента. Далее добавьте уранилацетат для усиления контраста органелл.
Обезвоживайте нейроны, используя увеличивающиеся концентрации этанола, и встраивайте их в смолу.
Микроскопически идентифицируйте области с плотностью клеток и удаляйте их. Затем подготовьте ультратонкие срезы.
Перенесите раздел на медную сетку и закрасьте его контрастными веществами.
Используя просвечивающую электронную микроскопию, везикулы, содержащие HRP, выглядят как электронно-плотные структуры.
Стимулируйте культуру нейронов гипп
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео