Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 3:38 мин. • April 28th, 2025
Начните с первичных гипоталамических нейронов мыши дикого типа и CCR5-нокаута, культивируемых на покрытых поли-D-лизином покровных листах в многолуночной пластине.
Эти нейроны экспрессируют зеленый флуоресцентный транспортер глюкозы-4, помеченный белком (GFP-GLUT4) в цитоплазме.
Перенесите покровные стекла на стеклянные слайды и аккуратно сотрите лишнюю среду, чтобы обеспечить стабильность во время получения изображения.
Поместите предметное стекло на предметный столик деконволюционного микроскопа покровным стеклом вниз.
Визуализируйте нейроны под ярким освещением, затем последовательно обработайте их хемокином CCL5 и инсулином.
Переключитесь на флуоресцентное освещение для идентификации нейронов-мишеней, экспрессирующих GFP-GLUT4, и настройте параметры визуализации для захвата живых флуоресцентных изображений.
В нейронах дикого типа инсулин и CCL5 связываются с рецептором инсулина и CCR5 соответственно, активируя нисходящие сигнальные пути, которые управляют транслокацией мембраны GFP-GLUT4.
В нейронах с нокаутом CCR5 CCL5 не связывается, что приводит к снижению транслокации GFP-GLUT4.
Захватите изображения и примените алгоритм деконволюции для уменьшения расфокусированного света, повыша
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео