Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 4:54 мин. • April 28th, 2025
Начните с участков мозга мыши, обнажающих дорсальный гиппокамп, богатый нейронами.
Добавьте перекись водорода для подавления активности нейрональной пероксидазы, а затем промойте.
Обработайте буфером для пермеабилизации, затем примените блокирующий буфер для блокировки неспецифического связывания.
Добавьте основные антитела и инкубируйте с агитацией. Эти антитела связываются с белками-маркерами активации нейронов.
Промойте и нанесите вторичные антитела, конъюгированные с биотином, для связывания первичных антител.
Промойте и введите комплекс авидин-биотин-пероксидаза, который связывается с биотином на конъюгатах.
Промойте еще раз, затем добавьте хромогенный субстрат, который окисляется пероксидазой для получения коричневого осадка. Остановите реакцию с помощью PBS.
Перенесите разделы на предметное стекло с желатиновым покрытием и обезвожьте их, используя возрастающие концентрации этанола. Затем очистите секции в ксилоле и установите их.
Поместите предметное стекло под светлопольный микроскоп.
При световом освещении неокрашенные участки пропускают свет и кажутся яркими, в то время как окрашенные нейроны поглощают и отражают свет и кажутся темнее.
Отчетливая более темная область указывает
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео