Одновременная визуализация динамики микроглии и активности нейронов у бодрствующей мыши

Начнем с трансгенной мыши, заключенной в стереотаксическую рамку, с черепным окном, имплантированным над ее зрительной корой.

Мышь экспрессирует EGFP в микроглии и R-CaMP, красный флуоресцентный индикатор кальция, в нейронах зрительной коры.

Поместите мышь под двухфотонный микроскоп и отрегулируйте линзу объектива так, чтобы она фокусировалась на поверхности мозга.

Переместите мышь со стереотаксической рамкой от линзы объектива и прикрепите затеняющее устройство.

Заполните затеняющее устройство водой и переместите мышь под микроскоп.

Накройте линзу черной фольгой.

Затеняющее устройство и фольга блокируют внешние световые помехи, обеспечивая точное изображение.

Поместите ЖК-монитор перед глазом мыши, чтобы обеспечить визуальную стимуляцию.

Установите параметры изображения и начните визуализацию.

Визуальная стимуляция запускает возбуждение нейронов, что приводит к притоку кальция и увеличению флуоресценции R-CaMP.

Между тем, микроглия втягивает свои отростки, взаимодействуя с активированными нейронами, что наблюдается с помощью визуализации в реальном времени.

Чтобы установить специально изготовленное затеняющее устройство и ЖК-монитор для визуальной стимуляции, сначала расположите линзу т