Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 6:00 мин. • May 29th, 2025
Возьмите срезы мозга гиппокампа у крысы, которой ввели бромоксиуридин или BrdU, нуклеозидный аналог тимидина.
BrdU встраивается в ДНК во время деления клетки, помечая вновь образованные нейроны в зубчатой извилине, области нейрогенеза.
Инкубируйте с окислителем для инактивации эндогенных ферментов пероксидазы.
Обработайте кислотой для денатурации ДНК и обнажите BrdU, затем нейтрализуйте кислоту.
Инкубируйте с детергентом для проникновения клеточных мембран и блокирующим раствором для маскировки неспецифических участков связывания.
Инкубируйте с первичными антителами, нацеленными на BrdU, с последующими вторичными антителами, меченными пероксидазой, специфичными к первичным антителам.
Введите хромогенный субстрат и окислитель, что позволит пероксидазе превратить субстрат в окрашенный остаток.
Смонтируйте ткань и нанесите противодействие красителем, связывающим нуклеиновые кислоты.
Обезвоживайте ткань, затем обработайте ее для повышения прозрачности.
Под микроскопом определите зубчатую извилину.
Используя технику оптического фракционатора, проанализируйте несколько плоскостей по толщине ткани, чтобы количественно определить нейроны, меченные BrdU.
Когда все будет готово к началу иммуноокрашив
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео