Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 2:36 мин. • May 29th, 2025
Возьмем, к примеру, трансгенную мышь под наркозом, экспрессирующую флуоресцентные белки в разреженных пирамидальных нейронах.
Мышь имплантируется с помощью канюли визуализации над дорсальным гиппокампом.
Расположите мышь под двухфотонным микроскопом на грелке, закрепив пластину канюли на держателе, чтобы обездвижить ее голову.
Наносите мазь, чтобы предотвратить высыхание роговицы.
Очистите канюлю деионизированной водой и осмотрите ее под объективом с малым увеличением, чтобы проверить наличие мусора, повреждений или проблем с флуоресценцией.
Совместите канюлю с изображением относительно оптической оси микроскопа для получения точной визуализации.
Затем переключитесь на объектив с погружением в воду с высоким разрешением.
Наполните канюлю деионизированной водой, не допуская образования пузырьков воздуха, чтобы избежать искажения изображения.
Выполняйте двухфотонную продольную визуализацию с использованием инфракрасного света для избирательного возбуждения флуорофоров в фокальной плоскости, что позволяет визуализировать глубокие ткани.
Имплантированная канюля облегчает повторный доступ к дорсальному гиппокампу для отслеживания дендритных изменений с течением времени.
Расположите мышь под микроскопом над ковром отопления и закрепите головную пластину на держателе. Нанесите глазную мазь на глаза животного. Затем очистите канюлю для визуализации с помощью шприца и тонкой иглы, чтобы капнуть деионизированную воду в канюлю, с последующим удалением с помощью вакуумного насоса.
Используйте объективы с малым увеличением и большим рабочим расстоянием, чтобы визуально проверить канюлю на наличие остатков воды, грязи, целостности и наличия флуоресценции. Затем выровняйте канюлю по оптической оси, регулируя углы рук головки-держателя.
Переключитесь на объектив с 25-кратным увеличением и числовой апертурой 1,0 и рабочим расстоянием 4 миллиметра. Затем добавьте в канюлю достаточное количество деионизированной воды, чтобы заполнить ее и поддерживать избыток воды на верхней части канюли. Наконец, используйте двухфотонное возбуждение и визуализируйте флуоресцентные сигналы.