Визуализация кальция in vitro в краткосрочных и долгосрочных культурах гиппокампа крыс

Возьмем краткосрочную культуру нейронов гиппокампа крысы, представляющую молодые нейроны, и долгосрочную культуру, представляющую старые нейроны.

Стареющие нейроны демонстрируют более высокую плотность потенциал-зависимых кальциевых каналов L-типа, или L-VGCC, которые остаются открытыми в течение более длительного времени после деполяризации мембраны.

Инкубируйте с флуоресцентным индикатором кальция, который диффундирует в клетки, затем промойте, чтобы удалить излишки красителя.

Поместите культуры в перфузионную камеру под флуоресцентным микроскопом.

Введите раствор, содержащий нейротрансмиттеры, которые связываются с рецепторами на нейронах, индуцируя приток ионов натрия и запуская деполяризацию мембраны.

Деполяризация активирует L-VGCC, обеспечивая приток кальция в цитоплазму.

В культуре длительного времени более высокая плотность и длительное открытие L-VGCC приводит к перегрузке кальцием, что является отличительной чертой старения нейронов.

Связывание кальция с индикатором генерирует флуоресценцию, при этом старые нейроны демонстрируют более высокую интенсивность флуоресценции, отражая повышенный внутриклеточный уровень кальция при стимуляции.

При этой процедуре клетки инкубируют с Фу