Анализ иммунных клеток в нервных тканях мышей с помощью проточной цитометрии

Возьмите клетки, выделенные из седалищных нервов мышей и ганглиев дорсальных корешков или DRG.

Инкубируйте с мечеными флуорофорами антителами против CD45 и CD11b, а также с меченными биотином антителами против MHC класса II, чтобы пометить иммунные клетки.

Инкубируйте с меченным флуорофором стрептавидином, который связывается с биотином.

Обработайте фиксатором для стабилизации клеточной структуры.

Введите буфер для пермеабилизации с флуоресцентным окрашиванием ДНК для проникновения мембран и мечения ядер.

С помощью проточного цитометра пропустите клетки через лазерный луч для оценки оптических и флуоресцентных характеристик.

Удалите агрегаты с более высокой флуоресценцией ДНК, чтобы изолировать отдельные клетки и обнаружить флуоресценцию из маркеров.

Идентифицировать клетки, экспрессирующие CD45, характерный маркер иммунных клеток, подтверждающий их наличие.

Большинство CD45-положительных клеток в DRG экспрессируют CD11b и MHC класса II, что указывает на микроглию, подобную клетке, которая отсутствует в седалищных нервах.

Этот метод дополняет визуализацию для анализа гетерогенности иммунных клеток в нервных тканях.

На компьютере выберите подходящие каналы для детектирования интересующих фл