Визуализация и картирование метокси-X04-меченых амилоидных бляшек в отделе мозга мыши, больном болезнью Альцгеймера

Начните с участка ткани мозга мыши, содержащего интересующую область в буфере для поддержания гидратации во время визуализации.

Ткань получена из мышиной модели с болезнью Альцгеймера, в которую был введен метокси X04, флуоресцентный краситель.

Methoxy X04 специфически связывается с β-гофрированными структурами листов в амилоидных бляшках и сохраняет свою флуоресценцию для визуализации и анализа.

Используя флуоресцентный микроскоп с УФ-фильтром, возбудите метокси-X04 и захватите излучаемую флуоресценцию, чтобы визуализировать флуоресцентно меченые амилоидные бляшки на фоне окружающих тканей.

Не регулируя предметный столик микроскопа, можно получить изображения одной и той же области в светлопольном режиме, чтобы детализировать структуру ткани, и флуоресцентном режиме, чтобы визуализировать бляшки.

Выравнивайте светлопольные и флуоресцентные изображения с помощью программного обеспечения для обработки изображений, чтобы точно отобразить бляшки на анатомических структурах.

Эти изображения обеспечивают детальную визуализацию амилоидных бляшек в их структурном контексте для изучения патологии болезни Альцгеймера.

С помощью стереотаксического атласа мозга мыши выберите участки мозга, содержащие интересующую область, и поместите каждый участок в криопротектор в лунку 24-луночного планшета. Затем с помощью одноразовой пипетки добавьте каплю PBS на предметное стекло микроскопа, а затем поместите срез на каплю.

Изучите срез под флуоресцентным микроскопом, чтобы выявить участки, содержащие метокси-X04-меченые А-бета бляшки. Не перемещая предметный столик микроскопа, можно получать изображения интересующих областей как в светлом поле, так и в флуоресцентном режиме. На каждом изображении должна быть видна одна и та же область в обоих полях, чтобы соотнести бляшку со структурной областью участка ткани.

Сохраните и назовите сделанные снимки в соответствии с номером животного. Кроме того, запишите номер колодца на табличке и поле сделанных фотографий. После завершения визуализации поместите срез обратно в предназначенную лунку. Исследуйте следующий участок в последовательности, используя ту же процедуру, чтобы избежать высыхания участков.

Чтобы выровнять изображения, откройте изображения светлого поля и UV-поля с одинаковым ROI на изображении J. Затем используйте плагин мозаики J, чтобы выровнять края двух изображений. Сохраните выровненное и объединенное изображение по номеру лунки в папке, с номером конкретного животного. Объедините изображения с разных участков одного и того же животного, чтобы идентифицировать и локализовать бляшки в интересующей области.