Морфологический и физиологический мониторинг опухолевых сфероидов с помощью оптической когерентной томографии

Начните с многолуночного планшета, содержащего опухолевые сфероиды, трехмерный агрегат раковых клеток.

Поместите его на предметный столик для оптической когерентной томографии или ОКТ-визуализации, убедившись, что он стабилизирован для точной визуализации.

Отрегулируйте объектив для оптимальной фокусировки света, установите параметры сканирования и начните съемку изображения с течением времени.

Когда свет взаимодействует с клетками, он отражается с разной интенсивностью в зависимости от клеточных структур и глубины.

ОКТ улавливает эти интенсивности отраженного света и создает двумерные изображения поперечного сечения с высоким разрешением в разных плоскостях.

Переместите планшет, чтобы получить изображения опухолевых сфероидов из всех лунок.

С помощью программного обеспечения выровняйте эти изображения и обработайте их для создания трехмерной модели сфероида, раскрывающей его морфологические характеристики, включая размер, форму и структуру.

Со временем клетки в сфероиде погибают, а их поврежденные структуры увеличивают рассеяние света, уменьшая интенсивность отраженного света.

Это позволяет дифференцировать жизнеспособные клетки от нежизнеспособных, что позволяет контролировать физиологические условия.

В день проведения визуализации опухолевых сфероидов извлеките многолуночный планшет из инкубатора. Перенесите его под систему ОКТ-визуализации и поместите на адаптер пластины. Чтобы отрегулировать высоту пластины, переместите ее по оси Z от этапа перевода. В пользовательском программном обеспечении для визуализации установите желаемый диапазон сканирования ОКТ, чтобы охватить весь сфероид опухоли, в зависимости от стадии ее развития, и нажмите «Сохранить параметры», чтобы сохранить настройку.

Затем покажите оптимизированные предварительные просмотры xz и yz OCT опухолевых сфероидов. Получение 3D ОКТ-изображений опухолевых сфероидов один за другим для всех лунок планшета, содержащих сфероиды. Чтобы просмотреть изображение для предварительного просмотра, нажмите кнопку «Предварительный просмотр». А чтобы получить ОКТ-изображение, нажмите кнопку «Получить». Записывайте общий процесс получения данных OCT в процессе перемещения по этапам.

- Чтобы обеспечить оптимальное качество изображения для всех опухолевых сфероидов, адаптер пластины должен быть точно настроен, а объем среды должен быть одинаковым.

- Использование пользовательского кода обработки C++ для обработки наборов данных 3D ОКТ опухолевых сфероидов для создания структурных изображений ОКТ. Используйте 2D ОКТ-изображения в 3 плоскостях поперечного сечения xy, xz и yz по центроиду сфероида для создания коллажа из сфероидальных изображений.