Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 3:16 мин. • May 29th, 2025
Возьмем культуру клеток-предшественников олигодендроцитов (OPC), выделенных из мозга детеныша крысы, которые были индуцированы к дифференцировке в олигодендроциты. Клетки фиксируются для сохранения клеточной архитектуры.
Дифференцированные олигодендроциты экспрессируют основной белок миелина, или MBP, маркер зрелых олигодендроцитов, в то время как OPC и дифференцированные клетки экспрессируют фактор транскрипции олигодендроцитов 2, или Olig2.
Применяют раствор, блокирующий пермеабилизацию, и инкубируют с перемешиванием, проникая в клеточные мембраны и блокируя неспецифические сайты связывания.
Добавьте первичные антитела, нацеленные на маркеры, и инкубируйте с перемешиванием, чтобы обеспечить связывание.
Промойте для удаления несвязанных антител, затем добавьте различные флуорофор-конъюгированные вторичные антитела, специфичные для первичных антител, и инкубируйте с перемешиванием.
Промойте клетки, затем поместите их в двойную флуоресцентную систему визуализации.
Используйте свет определенной длины волны для возбуждения различных флуорофоров и обнаруживайте излучаемые сигналы для визуализации маркеров.
Идентификация дифференцированных олигодендроцитов, экспрессирующих olig2 и MBP, среди
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео