JoVE Encyclopedia of Experiments
Нейронауки
0 просмотров • 2:27 мин • May 29th, 2025
Начните с мышей под наркозом с экспериментальным аутоиммунным энцефаломиелитом или ЭАЭ. Это состояние вызывает воспаление в глазах и головном мозге.
Поместите мышь в аппарат формирования изображений, выровняв верхнюю часть спинки по центру.
Накройте нижнюю часть мыши черной тканью, чтобы предотвратить помехи сигнала из этой области.
Используйте программное обеспечение для обработки изображений для записи положения мыши.
Возьмите шприц, наполненный реагентом, содержащим биолюминесцентный субстрат, и введите его внутрибрюшинно мыши.
Реагент циркулирует и проникает в очаг воспаления, где субстрат взаимодействует с ферментами, специфичными для воспаления.
Реакция фермент-субстрат производит биолюминесцентный сигнал.
Для мониторинга этого сигнала делайте снимки через равные промежутки времени.
Зрительный нерв находится у поверхности, что делает биолюминесценцию вокруг глаз заметной. В отличие от этого, сигналы от мозга слабые, так как череп поглощает излучаемый свет.
На изображении синий цвет указывает на легкое воспаление, а красный — на серьезное воспаление.
Для выполнения визуализации in vivo держите мышей под наркозом от 2 до 2,5% изофлурана во время всех процедур визуализации. Расположите двух мышей рядом друг с другом в аппарате, а верхние колючки мышей расположите в центре.
Далее закройте место иммунизации черной тканью. Откройте программу для захвата изображений и инициализируйте камеру. Затем сделайте исходное изображение, чтобы оценить правильное положение мышей.
Впоследствии используйте фокусировку B с расстоянием 6,5 сантиметра до камеры для съемки всех изображений. После этого смешайте готовый к использованию хемилюминесцентный реагент в дозе 40 мг на миллилитр перед заполнением шприца. Затем введите 100 микролитров его мышам внутрибрюшинно и получите биолюминесцентные изображения через 5, 10 и 15 минут после инъекции.