Визуализация нейрональных митохондрий с помощью серийного сканирующего электронного микроскопа

Возьмем обрезанный, залитый смолой участок ткани мозга мыши, содержащий гиппокамп.

Этот срез окрашен тяжелыми металлами для усиления контраста под электронным микроскопом.

Установите секцию на алюминиевый штифт с помощью цианоакрилатного клея.

Смажьте боковые стороны блока коллоидной серебряной пастой, чтобы создать проводящую траекторию к алюминиевому штифту.

Осмотрите тканевый блок с помощью серийного сканирующего электронного микроскопа (SBFSEM).

В SBFSEM ультрамикротом последовательно разрезает блок на ультратонкие слои, в то время как низковольтный электронный пучок сканирует открытую поверхность.

Детектор обратного рассеяния электронов захватывает 2D-изображения с высоким разрешением, выявляя митохондрии и окружающие клеточные структуры.

С помощью соответствующего программного обеспечения отрегулируйте яркость и контрастность для повышения четкости изображения.

Выровняйте последовательные изображения, чтобы реконструировать 3D-объем ткани мозга. Эта 3D-реконструкция позволяет точно отобразить морфологию митохондрий, пространственное распределение и их отношения в нейронных компартментах.

Обрежьте образцы в интересующей области и закрепите их на алюминиевом штифте с помощью гелеоб