Флуоресцентная фотоактивационная визуализация транспорта нейрофиламентов в миелинизированных аксонах мышей

Начните с перфузионной сборки, помещенной на предметный столик инвертированного микроскопа.

Перфузионный узел содержит рассеченный периферический нерв, закрепленный между покровным стеклом и предметным стеклом микроакведука с непрерывной перфузией физиологическим раствором.

Миелинизированные аксоны нерва экспрессируют зеленые нейрофиламенты, помеченные флуорофорами.

Используя светлопольное освещение, сосредоточьтесь на миелинизированных аксонах.

Переключитесь в конфокальный режим, фотоотбеливайте с помощью высокой мощности лазера, а затем получите эталонное изображение с низким уровнем автофлуоресценции с использованием низкой мощности лазера.

Проведите параллельные линии вдоль аксона, чтобы определить длину окна фотоактивации. Используйте это в качестве руководства для создания прямоугольной области активации.

Осветите эту область определенной длиной волны, чтобы активировать зеленые нейрофиламенты, помеченные флуорофорами, заставляя их флуоресцировать. Получите изображение.

После активации делайте цейтраферные снимки.

Со временем флуоресцентные нейрофиламенты перемещаются в обоих направлениях и распространяются на соседние фланговые области.

Появление флуоресценции в фланкирующих областях