Визуализация миграции глиального ядра Мюллера в живых клетках во время регенерации сетчатки данио-рерио

Начните со встроенного в агарозу дорсального экспланта сетчатки от трансгенной рыбки данио, помещенного во флюородиш со средой.

Сетчатка демонстрирует индуцированное светом повреждение фоторецепторов и содержит глиальные клетки Мюллера или MGC с ядрами, экспрессирующими GFP.

Поместите чашку в камеру многофотонного микроскопа.

Используя светлопольное освещение, сосредоточьтесь на сетчатке.

Переключитесь в режим флуоресценции, чтобы найти MGC.

Сконфигурируйте z-стек от слоя ганглиозных клеток (GCL) к внешнему ядерному слою (ONL).

Начните создание образа в реальном времени.

Поврежденные фоторецепторы высвобождают TNF-α, активируя MGC.

Ядра MGC мигрируют в основном во внутреннем ядерном слое или INL для репликации своей ДНК.

Затем ядра апикально мигрируют в ONL, чтобы подвергнуться митозу, производя нейрональных предшественников.

После митоза ядра и предшественники MGC мигрируют базально обратно в INL.

Предшественники размножаются, мигрируют к месту повреждения и дифференцируются в фоторецепторы, обеспечивая регенерацию сетчатки.

Анализируйте полученные изображения, чтобы визуализировать ядерную миграцию.

В программном обеспечении для получения изображений откройте окна A1 MP GUI, TiPad, A1 Compac