Покадровая визуализация трансфицированных первичных клеток коры головного мозга мыши

Возьмем многолуночную пластину с полимерным покрытием, содержащую эмбриональные клетки первичной коры головного мозга мыши, такие как клетки-предшественники и нейрональные клетки. Клетки-предшественники трансфицируются для экспрессии флуоресцентных белков для мечения и отслеживания.

Перенесите планшет в предварительно нагретую инкубационную камеру инвертированного флуоресцентного микроскопа для стабильной визуализации.

Найдите опорное положение на пластине для согласованного расположения изображения.

Выберите несколько полей визуализации для каждой лунки с большим увеличением, чтобы максимизировать вероятность наблюдения трансфицированных клеток.

Через равные промежутки времени можно одновременно получать фазово-контрастные изображения для выявления морфологии и динамики клеток, а также флуоресцентные изображения для мониторинга экспрессии флуоресцентных белков.

Сравнивайте покадровую съемку, фазово-контрастные и флуоресцентные изображения, чтобы отслеживать деление клеток-предшественников и дифференцировку в нейронные линии.

Чтобы визуализировать клетки, трансдуцированные ретровирусом, поместите планшет для культуры ткани в камеру визуализации, подключенную к регуляторам температуры и углекислого газа, чтобы поддерживать клетки в постоянных условиях 37 градусов Цельсия и 5% углекислого газа.

Выберите положение на оси XY, которое будет служить нулевой точкой, и откалибруйте нулевую точку. Выберите от 10 до 15 положений для каждой лунки, чтобы получить изображение с 10-кратным увеличением. Настройте программное обеспечение на получение фазово-контрастных изображений каждые пять минут и флуоресцентных изображений каждые три часа для снижения фототоксичности. Проверьте и отрегулируйте фокус в первые три часа эксперимента, так как он может измениться, пока температура уравновешивается.