Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 2:43 мин. • June 18th, 2025
Возьмите многолуночный планшет, содержащий адгезивные нейральные стволовые клетки или НСК, выделенные из трансгенного мозга мыши. Эти НСК содержат флуоресцентно меченный белок, специфичный для первой фазы роста, или G1.
Когда НСК делится, он флуоресцирует в фазе G1 клеточного цикла, не излучая флуоресценцию в других фазах.
Поместите пластину в камеру для визуализации конфокального лазерного сканирующего микроскопа, поддерживаемую при контролируемой температуре.
Выберите нужную линзу объектива и отрегулируйте интенсивность флуоресценции.
Настройте параметры для покадровой съемки.
Выберите опцию «Большое изображение» и запланируйте получение изображения через равные промежутки времени на желаемую продолжительность.
Используйте высокоскоростной резонансный сканер, чтобы избежать фотообесцвечивания и сохранить высокое разрешение.
Используйте настройку светлого поля для визуализации формы ячейки и используйте соответствующий флуоресцентный фильтр для захвата флуоресценции.
Запустите покадровую визуализацию НСК для визуализации различных фаз клеточного цикла.
Подготовьте конфокальный лазерный сканирующий микроскоп для получения изображений путем предварительного нагрева прилагаемой камеры контроля температуры до 37 градусов Цельсия в атмосфере с содержанием углекислого газа 5%. Поместите 96-луночный планшет внутрь предварительно нагретой камеры микроскопа и сфокусируйте первую лунку. Затем откройте программное обеспечение для обработки изображений и щелкните правой кнопкой мыши в главном окне, чтобы выбрать Acquisition Acquisition Controls and Deacquisition, чтобы открыть TI Pad и выбрать цель plan Apo VC 20x DIC.
Затем нажмите «Получить элементы управления захватом», а затем откройте параметры замедленной съемки. Установите центр каждой лунки в качестве позиции рабочей области и выберите опцию «Большое изображение» на 7 на 7 миллиметров в квадрате. Наблюдайте за мозаичным изображением вокруг центра каждой лунки. Установите перекрытие для большого мозаичного изображения на 5% и установите частоту так, чтобы снимки делались каждые 20 минут в течение 24 часов.
В разделе «Настройки A1 plus» выберите уровень напряжения фотоумножителя для каждой флуоресценции, указанной в строке меню. Выберите для получения изображений с помощью высокоскоростного резонансного сканера в формате 512 x 512 пикселей и используйте DIC для визуализации ячеек. Затем выберите папку для сохранения файлов данных. Нажмите кнопку «Запустить сейчас» в окне сбора данных ND, чтобы начать сбор данных.