JoVE Encyclopedia of Experiments
Нейронауки
0 просмотров • 2:24 мин • June 17th, 2025
Начните с мыши, находящейся под наркозом, закрепленной в системе мобильной клетки.
Мышь имеет предварительно имплантированную линзу с градиентным показателем преломления, нацеленную на миндалевидное тело мозга, где нейроны экспрессируют чувствительный к кальцию флуоресцентный белок.
Поверхность линзы закрыта для защиты.
Дайте мыши проснуться, затем примените воздушный поток для вращения клетки без трения.
Снимите крышку объектива и расположите миниатюрный микроскоп над мозгом.
Включите светодиодный индикатор микроскопа. Затем выровняйте микроскоп так, чтобы объектив оказался по центру поля зрения.
Сделайте снимок с объектива и отрегулируйте положение микроскопа.
Когда клетка вращается, движения ног мыши вызывают страх, стимулируя нейроны миндалевидного тела.
Это провоцирует приток ионов кальция, которые связываются с флуоресцентными индикаторами.
Светодиодный свет возбуждает эти показатели, связанные с кальцием, заставляя их флуоресцировать.
Градиентная линза с показателем преломления эффективно улавливает и передает эту флуоресценцию в микроскоп.
Это позволяет получать кальциевую визуализацию активности нейронов миндалевидного тела в режиме реального времени.
Чтобы оценить качество имплантации линзы GRIN, поместите карбоновую клетку под мышь, находящуюся под наркозом, на головной перекладине системы клеток мобильного дома, и включите поток воздуха, чтобы клетка двигалась свободно без трения. Используйте захват микроскопа и стереотаксический манипулятор для вертикального выравнивания миниатюрного микроскопа по раме, прежде чем опускать микроскоп до тех пор, пока поверхность имплантированной линзы GRIN не появится в поле зрения изображения в программном обеспечении. Совместите центр имплантированной линзы GRIN с центром поля зрения и сделайте снимок поверхности имплантированной линзы GRIN. Затем медленно поднимите объектив микроскопа, наблюдая за изображением на предмет появления GCaMP-экспрессирующих клеток.