Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 3:18 мин. • June 17th, 2025
Возьмем первичные корковые нейроны грызунов, культивируемые на стеклянной чашке со стеклянным дном, содержащей среду.
Эти клетки экспрессируют генетически кодируемый ALS-ассоциированный белок и биосенсор кальция.
Замените среду буфером с низким содержанием хлорида калия.
Инкубируйте для поддержания активности нейронов в состоянии покоя и исходного уровня кальция.
Установите чашку на предметный столик для конфокального микроскопа и расположите перфузионную трубку.
Используя светлопольное освещение, сосредоточьтесь на нейронах, затем переключитесь на флуоресцентную визуализацию.
С помощью лазера микроскопа возбуждайте биосенсор и регистрируйте флуоресцентное излучение, чтобы определить исходный уровень внутриклеточного кальция.
Далее профузируйте посуду буфером с высоким содержанием хлорида калия.
Высокая концентрация калия деполяризует нейроны, открывая потенциал-зависимые кальциевые каналы в пресинаптических окончаниях. Это обеспечивает приток кальция, который инициирует синаптическую активность нейронов.
Повышенное внутриклеточное содержание кальция связывается с биосенсором, вызывая конформационное изменение, которое усиливает флуоресценцию.
Продолжайте записывать флуоресценцию, чтобы изме
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео