Характеристика механических свойств тканей головного мозга мышей с помощью атомно-силовой микроскопии

Возьмите посуду с биоклеевым покрытием с обездвиженным срезом мозга мыши в предварительно подогретой среде.

Поместите его на предварительно нагретый атомно-силовой микроскоп или столик АСМ для поддержания физиологических условий.

Нанесите каплю среды на сферический валик консольной АСМ, расположенной над головкой АСМ.

Затем переместите головку АСМ и погрузите ее в среду.

Направьте лазерный луч на консоль, чтобы отслеживать отклонение кантилевера с помощью фотодиода.

Опустите зонд АСМ до тех пор, пока он не соприкоснется с поверхностью тканей мозга.

Для измерения податливости при ползучести запрограммируйте зонд АСМ на приложение постоянной силы.

Эта сила приводит к деформации ткани во время изгиба кантилевера. Лазер обнаруживает изгиб кантилевера

и измеряет жесткость тканей.

Для измерения силы релаксации углубляйте ткань на фиксированную глубину и поддерживайте ее.

Лазер отслеживает изгиб кантилевера для измерения сопротивления и расслабления тканей с течением времени, что позволяет точно оценить механические свойства ткани.

Осторожно загрузите в держатель зонда зонд АСМ с номинальной пружинной постоянной 0,03 ньютона на метр и боросиликатным шариком диаметром 20 микрометров. Поместите срез мозга, установленный в чашке Петри, на установленный на сцене нагреватель AFM, который был предварительно нагрет до 37 градусов Цельсия.

Затем добавьте около 2 миллилитров предварительно подогретой среды.

Затем осторожно добавьте каплю среды на зонд АСМ, чтобы защитить его от разрушения из-за поверхностного натяжения при опускании в среду, окружающую срез мозга. Затем переместите головку АСМ на рабочую область. И начинайте опускать голову до тех пор, пока она не будет погружена в среду.

С помощью оптического микроскопа переместите предметный столик так, чтобы интересующая область находилась ниже откалиброванного датчика АСМ. Затем опустите зонд АСМ, чтобы установить контакт с поверхностью ткани. Чтобы провести эксперименты по соблюдению ползучести, постройте функцию приложенной силы в редакторе функций программного обеспечения.

Функция состоит из 0,1-секундного нарастания до 0,05 наноньютона, которое удерживается в течение 20 секунд, за которым следует 1-секундное снижение до 0 наноньютонов. Программное обеспечение будет записывать данные о вдавливании зондов АСМ в ткань во время приложенной силовой функции. После запуска эксперимента по согласованию ползучести проведите эксперименты по релаксации силы, создав в программном обеспечении прикладную функцию отступа. Запустите эту функцию, пока программное обеспечение собирает данные о силе, которую испытывает датчик АСМ при вдавливании в ткань.