Визуализация и количественная оценка регенерации аксонов в аксотомизированных ганглиозных нейронах сетчатки крысы

Возьмем совместную культуру иммортализованных человеческих обонятельных оболочек глии, или клеток OEG, и аксотомизированных ганглиозных нейронов сетчатки крысы, или RGN, на покровном листе.

Клетки OEG проявляют нейрорегенеративные свойства, которые способствуют регенерации аксонов в RGN.

РГН имеют иммунометку таким образом, что их сомы, или клеточные тела, флуоресцируют красным цветом, а аксоны – зеленым.

С помощью монтажного носителя закрепите покровное стекло, содержащее элементы.

Используйте эпифлуоресцентный микроскоп для получения нескольких изображений RGN.

Откройте изображение в программном обеспечении для обработки изображений.

Количественно оцените процентное соотношение нейронов с аксонами по отношению к общему числу RGN.

Затем обведите аксон, начиная от сомы до конца, и начните отслеживание аксонов, чтобы определить длину всех аксонов.

Количественно оцените индекс регенерации аксонов путем деления суммы всех длин аксонов на общее количество RGN.

Установите покровные стекла с монтажным носителем и держите их при температуре 4 градуса Цельсия. Используйте 40-кратный объектив эпифлуоресцентного микроскопа для количественной оценки регенерации аксонов. Количественно оцените процент