Визуализация in vitro аксонального ветвления корковых нейронов мыши в режиме реального времени

0 просмотров3:21 мин • June 17th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Возьмем чашку для визуализации со стеклянным дном, содержащую эмбриональные корковые нейроны мыши.

Поместите чашку в климатическую камеру дифференциально-интерференционного контраста (DIC) микроскопа для поддержания жизнеспособности клеток во время визуализации.

Микроскопия DIC разделяет поляризованный свет на два луча, которые проходят через образец.

Изменения показателя преломления на образце приводят к фазовым сдвигам между этими пучками.

Когда пучки рекомбинируют, их интерференция создает высококонтрастное изображение, делая видимыми более тонкие ячеистые структуры.

Идентифицируйте нейроны с неразветвленными аксонами и используйте покадровую съемку для визуализации разветвления аксонов.

Лечите нетрином-1, внеклеточным направляющим сигналом, который связывается с аксональными рецепторами и запускает локализованный экзоцитоз.

Экзоцитарные везикулы доставляют компоненты мембраны к участкам, в то время как цитоскелет реорганизуется для поддержки расширения мембраны.

Под микроскопом эти изменения проявляются в виде небольших выступов, отмечающих начало разветвления аксонов.

Со временем эти выступы перерастают в зрелые аксональные ветви, иллюстрирующие динамический процесс развития нейронов.

Через два дня in vitro поместите стеклянную дно, содержащую нетрансфицированные нейроны, в предварительно нагретую влажную камеру окружающей среды. Используйте микроскоп, оснащенный 60-кратным апохроматом плана, объективом 1,4 NA, объективом DIC и конденсатором с высокой числовой апертурой для достижения наилучшего качества изображения и разрешения. Затем с помощью проходящего света отрегулируйте фокальную плоскость, чтобы найти нейроны через окуляры.

Для получения изображений разветвления аксонов с помощью DIC правильная настройка подсветки холодника будет иметь решающее значение для оптимизации изображения и имеет решающее значение для получения анализируемых результатов. Затем, когда интересующие вас нейроны находятся в поле зрения, используйте функцию сбора данных из нескольких областей в программном обеспечении для визуализации, чтобы найти и сохранить местоположения XYZ, по крайней мере, шести клеток. Теперь добавьте к конечной концентрации 250 нанограмм на миллилитр нетрина-1 или другой фактор, представляющий интерес для стимуляции клеток, и нажмите кнопку «Начать многозонное получение».

Последовательно получайте изображения в каждом положении каждые 20 секунд в течение 24 часов, приостанавливая съемку и перефокусируясь по мере необходимости. В программном обеспечении для обработки изображений просмотрите изображения, выбрав «Приложение», «Просмотреть многомерные данные», и откройте нужный файл. Определите стабильные ветви аксонов, которые формируются во время сеанса визуализации. Используйте инструмент Область трассировки для измерения устойчивой ветви аксона от основания аксона до кончика.

08:54

Выполнение спектроскопии на плазмонных наночастиц с передачей на основе Номарски-тип дифференциальной микроскопии интерференции

Похожие видео

0 Просмотры

09:03

Отбор проб и обработка носовых зубов с помощью цифровой высокоскоростной цилиарной видеомикроскопии – адаптация к пандемии COVID-19

Похожие видео

0 Просмотры

11:13

Сбор, расширение и дифференциация первичных моделей эпителиальных клеток носа человека для количественной оценки частоты биения ресничек

Похожие видео

0 Просмотры

06:39

Живая съемка Спинной Аксоны Корневая после ризотомия

Похожие видео

0 Просмотры

02:59

Покадровая визуализация радиальной миграции корковых нейронов в трансдуцированных срезах эмбрионального мозга мыши

Похожие видео

0 Просмотры

09:53

Двухфотонное В естественных условиях Визуализация дендритных шипиков в мыши Cortex Использование разреженных черепа Подготовка

Похожие видео

0 Просмотры

16:45

Одновременная Двухфотонное В Vivo Визуализации синаптических входов и Постсинаптических цели в коре головного мозга мыши ретроспленальной

Похожие видео

0 Просмотры

14:28

Использование Комбинированные методики для определения роли плазмалеммы доставкой в ​​Axon ветвление и морфогенеза нейронов

Похожие видео

0 Просмотры

06:16

Визуализация Thalamocortical аксона ветвления и синапса формирования в Organotypic Cocultures

Похожие видео

0 Просмотры

09:55

Крупномасштабные трехмерных изображений клеточной организации коры головного мозга мыши

Похожие видео

0 Просмотры

Последнее обновление: 1 августа 2026