JoVE Encyclopedia of Experiments
Нейронауки
0 просмотров • 2:13 мин • June 17th, 2025
Начните с мыши, находящейся под наркозом, с хирургически обнаженным коленчатым ганглием, скоплением периферических нейронов, обрабатывающих вкус.
Эти нейроны экспрессируют GCaMP, индикатор кальция, который флуоресцирует при связывании с кальцием.
Удалите всю жидкость, покрывающую ганглий, для четкой визуализации.
Поместите мышь на абсорбирующую подушечку под микроскопом и определите местоположение коленчатого ганглия с помощью анатомических ориентиров.
Используя соответствующий фильтр на эпифлуоресцентном эндоскопе, обнаружьте зеленую флуоресценцию от GCaMP-экспрессирующих нейронов.
Затем вставьте дозирующую иглу, подсоединенную к трубке для подачи теста, в рот мыши и подайте тест.
Тастант стимулирует клетки вкусовых рецепторов, высвобождая АТФ, которая связывается с рецепторами ганглиозных нейронов, вызывая приток кальция.
Эти ионы кальция связываются с GCaMPs, индуцируя флуоресцентное излучение.
Выровняйте камеру по полю зрения микроскопа и синхронизируйте запись видео с подачей сигнала для захвата нейронной активности в режиме реального времени за счет изменений флуоресценции.
Чтобы запустить тастантную панель, используйте всасывание, чтобы удалить жидкость из коленчатого сустава, и поместите мышь на абсорбирующую подушечку под препарирующим микроскопом. Используйте отверстие, оставленное в булле, отверстие в височной кости и седьмой нерв, чтобы найти коленчатый ганглий. И используйте фильтр FITC/GFP на эпифлуоресцентном эндоскопе для проверки отдельных GCaMP-экспрессирующих коленчатых ганглиозных нейронов. Плотно поместите дозирующую иглу на одну тональную линию в рот животного. Синхронизируйте начало видеосъемки с началом презентации, просматривая прямую трансляцию на предмет ответов.