Визуализация высвобождения нейротрансмиттеров с помощью флуоресцентных репортеров на основе клеточных нейротрансмиттеров

Возьмем мышь с черепным окном, содержащим тонкий слой черепа, чтобы обеспечить визуализацию мозга.

Движение головы ограничено с помощью прикрепленной перекладины для головы.

В кору головного мозга предварительно вводятся клеточные нейротрансмиттеры, флуоресцентные репортеры, или CNiFER, которые представляют собой репортерные клетки, позволяющие обнаруживать высвобождение нейротрансмиттеров в режиме реального времени.

CNiFERs экспрессируют рецептор нейротрансмиттера, связанный с G-белком, и цитоплазматический детектор кальция, который состоит из кальций-связывающего домена, слитого с донором и акцептором флуорофорами.

С помощью двухфотонного микроскопа возбудите детектор, чтобы вызвать донорское флуоресцентное излучение, и включите визуализацию CNiFER.

Активность нейронов, достигающая коры головного мозга, вызывает высвобождение нейротрансмиттеров.

Эти нейротрансмиттеры связываются с рецепторами CNiFER и активируют сигнальные пути, которые индуцируют высвобождение кальция из эндоплазматического ретикулума.

Повышенное содержание цитоплазматического кальция связывается с детектором, вызывая конформационное изменение, которое приводит к сближению флуорофоров.

Донор передает энергию акцептору д