Биолюминесцентная визуализация иммунокомпетентной мышиной модели глиобластомы

Начните с анестезируемой иммунокомпетентной мыши с опухолевыми клетками, экспрессирующими люциферазу, имплантированными в ткань мозга.

Мышь также вводят люциферин, субстрат для фермента люциферазы.

Люциферин циркулирует в кровотоке, пересекает гематоэнцефалический барьер и достигает опухолевых клеток, экспрессирующих люциферазу.

Настройте систему визуализации с параметрами для измерения биолюминесцентных сигналов от опухолевых клеток, экспрессирующих люциферазу.

Поместите мышь под наркозом в камеру биолюминесцентной визуализации и получите изображения.

Люциферин проникает в клетку и взаимодействует с ферментом люциферазой, производя биолюминесцентный сигнал, пропорциональный количеству опухолевых клеток.

Используйте инструмент Область интереса для определения области сигнала и количественной оценки биолюминесцентного сигнала.

Чтобы оценить рост опухоли, повторите визуализацию в течение нескольких дней и измерьте сигнал люминесценции из той же области.

Со временем клетки, экспрессирующие люциферазу, начинают пролиферировать, образуя глиобластому или опухоль.

Увеличение сигналов люминесценции подтверждает рост глиобластомы.

Чтобы визуализировать рост внутричерепной опухоли, сначала инициализируйте станцию визуализации, как показано выше.

Затем, после подтверждения соответствующего уровня седации путем пощипывания хвостом, настройте параметры системы визуализации, как показано выше, за исключением выбора параметра «Авто» для времени экспозиции. Когда система визуализации будет готова, поместите мышей на станцию визуализации и выберите «Получить», чтобы получить изображения экспрессии люциферазы. После успешного получения изображения выберите инструмент «Область интереса» на палитре инструментов и «Авто» на значке круга.

Обведите области сигнала, чтобы определить области интереса. А затем получить измерения областей в единицах фотонов в секунду на стерадиан на квадратный сантиметр. Наконец, удалите мышей из камеры визуализации и наблюдайте за животными с опухолями до тех пор, пока они полностью не выздоровеют.