Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 4:07 мин. • June 17th, 2025
Начните с химически фиксированных и проникающих мышечных волокон мышей, помещенных в лунки многолуночной пластины.
Инкубируйте в блокирующем растворе, чтобы свести к минимуму связывание неспецифических антител.
Добавьте первичные антитела, нацеленные на пресинаптический белок, экспрессируемый в нервно-мышечном соединении или NMJ.
Промойте буфером, чтобы удалить несвязанные антитела.
Инкубируйте с флуорофор-конъюгированными вторичными антителами, нацеленными на первичные антитела, и фторофор-конъюгированным нейротоксином, который связывается с постсинаптическими ацетилхолиновыми рецепторами.
Промойте буфером, чтобы удалить несвязанные реагенты.
Поместите волокна на предметное стекло с монтажным материалом, установите покровное стекло и закрепите цилиндрическими магнитами, чтобы выровнять волокна.
Начните визуализацию с помощью микроскопа confocal-STED.
При лазерном освещении меченые белки флуоресцируют.
Конфокальная микроскопия не позволяет с четкостью разлучать более тонкие структуры NMJ из-за ограниченного разрешения и разброса флуоресценции.
В отличие от этого, в микроскопии STED используется истощающий лазер для подавления распространения флуоресценции, что позволяет получить четкую визуа
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео