Визуализация in vivo транспорта спинномозговой жидкости в мозге мыши с помощью флуоресцентной макроскопии

Начните с мыши, находящейся под наркозом, с хирургически обнаженным черепом, расположенной под флуоресцентным макроскопом.

Голова стабилизируется с помощью головной пластины над черепом, создавая черепное окно.

Канюля, содержащая флуоресцентный индикатор, вводится в большую цистерну головного мозга, или КМ.

КМ служит резервуаром для спинномозговой жидкости, или ликвора, которая циркулирует через субарахноидальное пространство, окружающее мозг.

Используя видимый свет, сосредоточьтесь на черепе.

Введите флуоресцентный индикатор в КМ, затем переключитесь на флуоресцентную визуализацию.

Подсвечивайте с помощью света определенной длины волны, чтобы возбудить трассер.

Индикатор поглощает этот свет и излучает флуоресцентные сигналы.

Флуоресцентные индикаторы перемещаются вместе с ликвором, что позволяет визуализировать его течение через субарахноидальное пространство в периваскулярные пространства, окружающие мозговые артерии и проникающие

артериолы, попадая в ткани мозга.

Захват флуоресцентного сигнала во времени для визуализации потока спинномозговой жидкости.

Осторожно поместите мышь и инфузионный насос, прикрепленные к канюле, на тележку для транспортировки к макроскопу, а держатель головки поместите на столик макроскопа. Убедитесь, что линия от шприцевого насоса к канюле Cisterna Magna не натянута и не имеет перегибов. Наблюдайте за частотой дыхания и розовой окраской слизистых оболочек, чтобы подтвердить хорошее насыщение кислородом.

Включите камеру микроскопа и светодиод и запустите режим реального времени. Отрегулируйте увеличение поля визуализации таким образом, чтобы можно было четко визуализировать нософронтальный шов в верхней части поля и лямбдоидный шов в нижней части. Оказавшись на месте, прикрепите держатель головы к предметному столику для макроскопа и сфокусируйте макроскоп на открытом черепе до тех пор, пока фокальная плоскость не окажется на боковых сторонах теменных костей, позади коронарных швов.

Для инфузии индикатора спинномозговой жидкости установите инфузионный насос на соответствующую скорость и объем, а также установите соответствующую длину волны возбуждения и время воздействия индикатора для каждого канала. Затем убедитесь, что функция запуска макроскопа верна, прежде чем одновременно инициировать инфузию индикатора и визуализацию.