Визуализация миграции опухолевых клеток в ткани глиобластомы с помощью покадровой сканирующей конфокальной микроскопии

Начните со среза ткани глиобластомы, полученного из хирургически удаленной опухоли.

Поддерживайте срез ткани в культуральной среде для поддержания выживания клеток.

Опухолевые клетки внутри среза экспрессируют зеленый флуоресцентный белок, или GFP, который облегчает визуализацию опухолевых клеток во время миграции клеток.

Поместите культуральную пластину, содержащую срезы ткани, на предметное столико конфокального микроскопа.

Расположите инкубатор на ступеньке так, чтобы поддерживать температуру среды.

Выберите объектив и визуализируйте срез культуры под микроскопом.

Микроскопы используют лазерный свет для возбуждения флуоресцентных белков в клетках.

Теперь сканируйте образец слой за слоем, чтобы получить изображения на разной глубине.

Сложите изображения в стопку, чтобы создать подробное 3D-представление ячеек.

Затем через равные промежутки времени можно получать изображения Z-стека, чтобы отслеживать движение и направление клеток, что позволяет изучать миграцию опухолевых клеток с течением времени.

Поместите чашку в герметичный микроскоп с углом нагревания 5%_CO2 с температурой 37 градусов и конфокальным микроскопом. Используйте 10-кратный воздушный объектив с большим рабочим расстоянием в сочетании с однофотонной или многофотонной визуализацией для получения трехмерных изображений миграции клеток с временным разрешением. Визуализируйте срез с помощью микроскопа, найдя подходящее поле с достаточной плотностью флуоресцентно меченных опухолевых клеток между краем среза и центром ткани. Затем в режиме многомерного анализа программного обеспечения для обработки изображений установите центр z-стека таким образом, чтобы все позиции, подлежащие изображению, содержали видимый флуоресцентный клеточный сигнал. И установите достаточное время для каждого получения z-стека.