Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 2:33 мин. • June 17th, 2025
Возьмите покровное стекло с полимерным покрытием, содержащее смешанную культуру нейронов и астроцитов в записывающей камере.
Эти трансфицированные клетки экспрессируют кальций-чувствительные белки на плазматических и ER-мембранах, флуоресцируя при связывании с кальцием для отслеживания субклеточной динамики кальция.
Добавьте среду, содержащую ионы кальция, и накройте камеру, чтобы предотвратить испарение.
Поместите камеру под флуоресцентный микроскоп.
Ионы кальция связываются с кальций-чувствительными белками. При облучении синим светом чувствительные к кальцию белки на внешней мембране ER флуоресцируют зеленым цветом. Используйте эту зеленую флуоресценцию для определения местоположения астроцитов.
Далее облучайте зеленым светом. Чувствительные к кальцию белки на плазматической мембране флуоресцируют красным цветом. Подтвердите наличие красной флуоресценции у того же астроцита, проявляющего зеленую флуоресценцию.
Запишите покадровые изображения кальций-чувствительных белков на плазматической мембране, а затем кальций-чувствительных белков на внешней мембране ER.
Проанализируйте изображения, чтобы наблюдать специфическую для компартмента спонтанную активность кальция в выбранном астроците.
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео