Клинические испытания и удаления спинного мозга у мышей на боковой амиотрофический склероз (ALS)

Модель мыши для боковой амиотрофический склероз (БАС) рассматриваются клинические и поведенческие. В качестве предварительного условия для сопровождающих immunohistological анализ подготовки спинного мозга изображен в деталях.

Здравствуйте, меня зовут Лар Тернер. Я являюсь постдоком на кафедре неврологии в Университете Ингхэма, Германия. Здравствуйте, меня зовут Линь Гунда.

Я студент-медик и работаю над диссертацией в этой лаборатории. Сегодня мы покажем вам клинические испытания SODG 93, модели атрофического бокового склероза по методу Мосса. Кроме того, мы продемонстрируем тест двигательной функции с помощью так называемого роторного теста и, кроме того, еще один тест двигательной функции с помощью висячей проволочной рукоятки для проведения иммунологического анализа.

После функционального тестирования мышей необходимая процедура заключается в удалении спинного мозга, нерва STIC и икроножной мышцы. Мы хотим подробно рассказать об этих хирургических процедурах, а в конце представить некоторые образцовые результаты иммунологической экспертизы. Хорошо, но теперь давайте начнем с клинических испытаний.

Это свободно движущийся дикий тип MOE, который не проявляет никаких клинических симптомов, таких как мышечный тремор или парсис, в нашей системе клинической классификации. Это был бы четвертый балл. Это трансгенный A LS moe.

На ранней стадии заболевания у него наблюдается сильный тремор правой конечности, который классифицирует его как SCORE 3 E. Серьезные аномалии походки Классифицируйте это животное как score two. Волочение по крайней мере одной задней конечности классифицируется как один клинический балл в тесте с висячей проволокой, оценивается грубая мышечная сила ребер. Каждая мышь помещается на проволоку CustomMade и осторожно переворачивается вверх ногами над опцией, покрытой соломой.

После тренировки в течение трех последовательных тренировок продолжительностью не менее 180 секунд измеряется задержка до падения. Каждой мыши дается до трех попыток удерживать перевернутую крышку в течение максимум 180 секунд, и самый долгий период записывается по сравнению с белой проволочной мышью с правой стороны. Бляшка трансгенной мыши слева очень слабая и отваливается от крышки, не достигнув максимума.

Стержень ротора используется для измерения координации движений, равновесия и способности к двигательному обучению. Хорошая производительность требует высокого уровня сенсорно-моторной координации. Он состоит из вращающегося шпинделя, управляемого компьютером и приводимого в движение двигателем, и пяти дорожек на пять метров.

Неисправности мышей обнаруживаются автоматически при надавливании на нижнюю пластиковую пластину. После тренировки в течение трех последовательных раз не менее 180 секунд с постоянной скоростью 15 выстрелов в минуту измеряется время, в течение которого животное может оставаться на вращающейся гниль. Каждое животное проходит три испытания и фиксируется самая длительная задержка без падений.

Здоровый дикий тип mos с левой стороны без труда работает на стержне ротора. Напротив, трансгенный а-с-мо с правой стороны имеет серьезные проблемы даже с удержанием на стержне ротора и соскальзывает через некоторое время, наблюдаемое сзади. Вы видите серьезные трудности при беге левой мыши.

По сравнению со здоровой проволочной мышью, она не в состоянии идти в ногу со скоростью стержня ротора и не может толкать вверх с помощью конечностей HON. Для того, чтобы провести иммунохимический анализ спинного мозга, животных приходится приносить в жертву. Очень важно всегда строго следовать местным рекомендациям по правильному проведению экспериментов на животных.

В этом контексте в этом очень упрощенном обзоре позвоночного столба и окружающих его тканей изображены основные анатомические структуры. Мы поместим животное на его брюшную сторону и начнем готовить мышцы из спинного мешка. После удаления мышечной ткани мы получим доступ к позвоночному столбу, который окружает спинной мозг.

После того, как животное было принесено в жертву и пробито раствором, содержащим параформу, спинной мозг может быть удален. Животное помещают на операционный стол, а полные конечности фиксируют по бокам и приказывают обнажить заднюю часть мыши. Животное смачивают для выравнивания шерстяного покрова и облегчения последующего разреза кожи.

Для этого используется острый скальпель. Будьте осторожны, чтобы растянуть кожу в обе стороны. Для облегчения разрезания мышцы ноги необходимо подготовить.

Их кожа также должна быть надрезана. После того, как разрез кожи завершен, его аккуратно оттягивают в сторону. С помощью пинцета, удалив мышцы ног и седалищный нерв, мы продолжаем приближаться к спинному мозгу и помещаем животное на новый операционный стол.

Теперь легко определить черепную шею, мышцы и позвоночный столб. Определив все эти структуры, легко переходить к следующему шагу. Мышцы шеи и ню-связки должны быть удалены.

Будьте осторожны, чтобы не делать слишком глубокий надрез и не вести позвоночный столб. На следующем этапе паравертебральные мышцы полностью удаляются, чтобы обнажить позвоночный столб. Для того, чтобы получить доступ к позвоночному столбу, необходимо сделать несколько эктомий.

Начнем с шейной части позвоночного столба, включая атлантический затылочный сустав. Чтобы выполнить ламинэктомию, мы должны разрезать дугу позвонка, чтобы иметь возможность удалить все позвоночные отростки из тела позвонка. Как объяснялось ранее, ламинэктомия начинается с разрезания дуг позвонков.

Затем лайну можно оттянуть. Опять же, следите за тем, чтобы не повредить спинной мозг, так как необходимо удалить еще много RAL. Весьма полезно использовать наклонные ножницы и прокручивать несколько дуг позвонков с обеих сторон одновременно.

Затем потяните за спинные отростки, чтобы полностью удалить позвоночную лапу и крупный план. Вы видите, что ножницы должны быть аккуратно введены наиболее латерально сбоку от спинномозгового канала. Оставшиеся боковые части позвоночного столба должны быть удалены, чтобы облегчить последующее полное удаление спинного мозга.

Анатомическим ориентиром спинного мозга являются так называемые шейные и поясничные эсенции. Закончив эктомию всего спинного мозга, убедитесь, что вы также пересекли все вентральные корешки спинного мозга и освободили его от твердых мозговых оболочек. Далее происходит разрезание шейного отдела спинного мозга.

Краниально и его удаление начинается заново. Прикасайтесь к спинному мозгу очень осторожно, чтобы не навредить этой ткани, ведь это может вызвать серьезные ограничения для последующего иммунохимического анализа. Удаление спинного мозга далее продолжается на грудном уровне и переходит в поясничный отдел.

Наконец, он снова разрезается, на этот раз сбоку от шнура лошади. Теперь мы можем полностью его освободить. Здесь Вы видите спинной мозг, расположенный рядом с его исходным положением в столбце RAL.

В конечном итоге его помещают в раствор для постфиксации Paraform Hyde. В качестве классического примера иммуногистохимического анализа спинного мозга можно применить антитело, распознающее холин, ацетилтрансферазу для идентификации моторных нейронов в переднем роге спинного мозга. Здесь вы видите большое количество двигательных нейронов у здорового дикого типа Животное.

Напротив, трансгенное животное с LS на конечной стадии демонстрирует гораздо меньшее количество моторных нейронов в переднем роге. Посмотрев эту видеостатью, вы должны были узнать основы клинического обследования SODG 93. Мышиная модель атрофического бокового склероза.

Были продемонстрированы два поведенческих теста двигателя: испытание ротора и испытание с висячим тросом. Они дают хорошую возможность оценить основные двигательные функции. Они просты в выполнении, чувствительны в обнаружении двигательного дефицита и эффективны по времени.

Основная часть данного видео заключается в демонстрации техники подготовки спинного мозга. Это, конечно, может быть применено к любой другой модели заболевания мышей и является важным шагом для последующего иммунохимического анализа патологии заболевания спинного мозга. Спасибо за просмотр.

Надеемся, что эта видеостатья будет полезна для ваших будущих экспериментов.