Устные биопленки выборки для анализа микрофлора в здоровых детей

Общая цель этой процедуры заключается в том, чтобы представить стандартизированный метод забора биопленки из полости рта для анализа микробиома у здоровых детей. Это достигается путем предварительной подготовки и стерилизации инструментов и материалов. Далее ребенка готовят к забору биопленки.

Затем берется биопленка из трех участков: поддесневой борозды, слизистой оболочки вестибулярной складки и слюны. Наконец, образцы систематически хранятся. В конечном счете, будет проведен анализ микробиома полости рта, чтобы ответить на клинические и научные вопросы.

Здравствуйте, меня зовут Элизабет, и я ортодонт. Мои исследования сосредоточены на изменениях микробиома полости рта, которые происходят вместе с ортодонтическим лечением. Забор биопленки для полости рта может быть сложным.

Пространство в поддесневой борозде ограничено, особенно у детей. Сравнивая наши данные о микробиоме с мировыми исследованиями, мы обнаружили нехватку стандартизированных протоколов отбора проб. В этом видео мы делаем первый шаг к заполнению этого пробела.

Калиброванные и стерильные бумажные острия, которые обычно используются в эндодонтической терапии, разрезаются на первой кольцевой отметке, чтобы нормировать их длину. После резки бумажные наконечники должны быть облучены ультрафиолетовым излучением, чтобы избежать загрязнения ДНК и РНК. Пробирки для хранения также будут автоклавированы и облучены ультрафиолетом.

Перед взятием биопленки зубы необходимо полностью очистить, начиная с нанесения масла какао. Затем зубы окрашиваются с обнажением зубного налета. После окрашивания ротовую полость полоскают водой.

Зубы правильно чистятся электрической зубной щеткой и водой. Зубная паста не наносится, так как это может изменить биопленку полости рта. Ретрактор для щек и языка используется для того, чтобы рот оставался открытым и сухим.

Установка ретрактора требует умелых и твердых рук, чтобы свести к минимуму дискомфорт для ребенка и сделать процедуру как можно короче. Используется стерильный стоматологический пинцет, при этом место отбора проб остается нетронутым на протяжении всей процедуры. Зубы очищаются и высушиваются стерильными ватными тампонами, чтобы избежать впитывания наддесневой жидкости во время точечного отбора проб из бумаги.

Для забора биопленки в полости рта можно использовать различные методы. Из-за ограниченного пространства в поддесневой борозде у детей предпочтительным методом является точечный забор из бумаги. Точки для бумаги вставляются по касательной длиной до четырех миллиметров в течение 20 секунд.

Необходимо соблюдать особую осторожность, чтобы не травмировать соединительный эпителий. Затем бумажные кончики обрезаются на третьей отметке до стандартной длины четыре миллиметра. Бумажная точка также может быть вставлена одновременно в один и тот же участок или образцы могут быть объединены с нескольких участков.

Аппарат сухого поля удаляется для забора слизистой оболочки и слюны. Таким же образом можно прикладывать бумажные точки для забора биопленки слизистой оболочки в вестибулярной складке. Биопленку слюны можно собрать, выплевывая нестимулированную слюну.

В зависимости от плана исследования бумажные точки будут храниться в виде одиночных, объединенных или параллельных образцов. Система хранения с цветовой кодировкой упростит дальнейшее управление образцами. Наконец, образцы хранятся для анализа микробиома при температуре минус 80 градусов по Цельсию.

Для быстрой и точной идентификации пародонтопатогенных бактерий было разработано несколько коммерческих наборов. Бумажные пункты отправляются в специализированные лаборатории. Затем в течение трех часов проводится экстракция, подготовка и анализ ДНК.

ДНК также может быть использована в исследованиях для изучения микробиома. Секвенирование нового поколения, например, приводит к созданию полных наборов данных микробиома. Можно проанализировать общую относительную численность определенных видов бактерий, а также сдвиги в микробиоте, вызванные изменением условий.

Эта гистограмма и тепловая карта отображают относительную численность поддесневой микробиоты по типу и на уровне порядка. Различия в микробном составе с течением времени, сравнения между отдельными особями или внутри них или различные методы отбора проб представлены в гистограммах. На этом рисунке представлены результаты сравнения двух методов выборки, способа А и способа В, на разных таксономических уровнях.

Статистический анализ значений, полученных с помощью секвенирования нового поколения, может быть представлен в таблицах. Различные временные точки, как показано в этой таблице, могут быть проанализированы на разных таксономических уровнях. P-значения рассчитываются для доказательства значимых результатов.

Наконец, микробиом полости рта на уровне OTU может быть визуализирован с помощью анализа главных координат. На этом рисунке показаны внутри- и межиндивидуальные различия у пяти субъектов. Кластеризация определенных групп может свидетельствовать о сдвигах в составе микробиома.

Эта 3D-анимация показывает результаты исследования случай-контроль. Красные точки — это случаи. Синие точки — это элементы управления.

Четкая кластеризация случаев после ортодонтического вмешательства в Т3, большие красные точки, визуализируют сдвиг в микробиоме. Синие точки, показывающие контрольную группу, распределены равномерно. Этот метод может дать представление о клиническом отборе проб биопленки в поддесневой борозде здоровых детей.

Мы выбрали бумажные пункты, как наиболее подходящие для этого уязвимого отделения. В этом видео мы применили метод только к постоянному состоянию. Он также может применяться в смешанном или зрелом состоянии.

У некоторых пациентов вы также можете взять образцы пародонтально пораженных участков в соответствии с тем же протоколом. Здравствуйте, меня зовут Барбара, и я молекулярный микробиолог. Когда я анализирую биопленку в лаборатории, мне приходится полагаться на библиотеку непредвзятых клинических образцов.

Каждый шаг в междисциплинарной области исследований микрофлориды полости рта должен быть полностью стандартизирован. И есть еще один немаловажный факт. Быть успешным можно только в команде.

Поэтому всегда относитесь к своим коллегам хорошо.