Журнал
/
/
Постоянного тока транскраниальной стимуляции (ЦТД) у мышей
JoVE Journal
Нейронаука
Author Produced
Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove  Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.
JoVE Journal Нейронаука
Transcranial Direct Current Stimulation (tDCS) in Mice

Постоянного тока транскраниальной стимуляции (ЦТД) у мышей

English

Сгенерировано автоматически

13,693 Views

11:54 min

September 23, 2018

DOI:

11:54 min
September 23, 2018

7 Views
, , , , , , , , ,

ТРАНСКРИПТ

Automatically generated

Процедура Alvar Gaaud заключается в применении транскраниальной стимуляции прямого тока у мышей. Это достигается путем генерации низких интенсивных течений из генератора прямого тока и отправки его непосредственно животному через электроды. tDCS был исследован как немедикаментозная терапевтическая альтернатива для основных психических расстройств у людей, таких как депрессия, шизофрения, болезнь Альцгеймера, AHDH, и аутизм.

Кроме того, tDCS является уникальной техникой из-за его низкой стоимости, простоты использования и неинвазивного профиля. Тем не менее, биологические эффекты tDCS не совсем понял, и нет консенсуса в отношении параметров стимуляции, таких как текущая интенсивность, продолжительность, и плитка областей мозга. Для этого использование минимальных заказов имеет важное значение для тщательного изучения таких механизмов, что приведет к лучшему пониманию клинической эффективности tDCS путем приобретения и анализа поведения клеточных и молекулярных данных.

В настоящее время существуют две установки электродов для tDCS, называемые анодальной и катодальной стимуляцией. При анодальной стимуляции токи доставляются непосредственно в голову животного, через тело животного и в катод, расположенный на грудной клетке животного. В то время как в катодной стимуляции ток проникает через грудную клетку животного, перемещается до его головы и в катод.

В обеих ситуациях ток-генератор контролирует текущую интенсивность и продолжительность стимуляции. При производстве качества контакта и вывод обратной связи. Есть много различных установок для активного позиционирования.

Для этого следует принимать во внимание все трехмерные оси. В этом протоколе головной электрод был имплантирован на один миллиметр в корневую брегму, на среднюю линию черепа, а электрод тела был расположен на груди животного. Из-за короткого периода моделирования, было рекомендовано использовать быстрое действие и краткосрочной анестезии, такие как испаряется изофлюран.

Эта процедура состоит из двух важнейших шагов. Размещение электродов и транскраниальная стимуляция прямого тока. Хирургические инструменты были стерилизованы при предварительном обслуживании при 440 градусах цельсия.

Хлопковые тампоны были autoclaved на 20 фунтов на квадратный дюйм при 121 градусов по Цельсию в течение 20 минут. Поверните контроллер тепловой платформы до 37 градусов по Цельсию. Взвесить животное и рассчитать соответствующую дозу для индукции анестезии.

Используйте смесь кетамина и ксилазина в дозе 100 миллиграммов на килограмм кетамина и 8 миллиграммов на килограмм ксилазина. Размер иглы 31G. Зверь должен заснуть в течение 2-3 минут.

Используйте электрическую бритву или бритву, чтобы побрить хирургическое место. Поместите животное на стереотаксисный аппарат над предварительно разогретой нагревательной пластиной. Держите голову животного и вставьте кончик уха в уши каждого животного, чтобы зафиксировать его на стеротаксисной платформе.

Убедитесь, что нет бокового смещения головы, и мало вертикального движения, медленно перемещая голову животного. Аккуратно сдвиньте маску анестезии над носом мыши и зафиксировать на месте, затягивая винт. Нанесите мазь на глаза животного, чтобы предотвратить высыхание роговицы во время операции.

Используйте ватный тампон для подготовки хирургического участка с тремя чередующимися скрабами йода повидоне, или 2%хлорогексидина и 70% этинола. Используйте пару пинцетов для проверки анестезии принять, слегка сжимая ног животного, и проверки законов животных педо-вывода общего щепотку рефлекс. Сделайте разрез около трех миллиметров задней линии уха животного, и остановитесь в линии глаза.

Место разреза должно иметь примерно один сантиметр в длину, чтобы быть достаточно большим, чтобы получить имплантат. Аккуратно соскребать череп с костной скребок для улучшения клея и цемента соблюдения. Это должно быть сделано легко передал с намерением создания микро-царапин.

Тщательно распоистите хирургические крючки для свободной кожи, чтобы сохранить открытое хирургическое поле и освободить его от препятствий, таких как кожа меха. Используйте стерильный ватный тампон, чтобы аккуратно высушить кожу головы животного. Используйте микроскоп для визуализации верхней части черепа животного.

Прикрепите иглу к держатель sterotaxic и найти брегму. Позиция иглы прямо над головой животного слегка касаясь брегмы. Используйте брегму в качестве ссылки для корректировки координат области интересов.

Зафиксировать имплантат на стереотаксисе. Распоить имплантат над головой животного и медленно опустить его в область интереса. Используйте иглу, чтобы распространить одну каплю, приблизительно 35 микролитров, суперклея на пространство имплантата.

Медленно двигай держатель вниз, пока он не коснется черепа. Убедитесь, что пространство имплантата полностью находится в контакте с поверхностью. Подготовка хирургического цемента в соответствии с инструкциями производителя.

После точного позиционирования нанесите три тонких, даже слоя цемента поперек черепа и на нижнюю часть имплантата. Нанесите каплю на каплю с помощью кисти приложения. Слои должны образовывать U-образную структуру для дальнейшей структурной поддержки имплантата.

Оставьте винтовую нить имплантата чистой цемента, чтобы обеспечить гладкое, беспрепятственное соединение. Дайте каждому слою высохнуть в течение примерно четырех минут. После высыхания осторожно удалите держатель, пока он полностью не отсоединится от имплантата.

Всегда используйте крайнюю осторожность при обращении с имплантатом, так как он может быть случайно удален из черепа животного. Увлажните кожу животного и место разреза солевым пропитанным ватным тампоном. Вырежьте кожу над основанием имплантата.

Используйте пару пинцетов, чтобы объединить ткани, и закрыть разрез с одной каплей ткани хирургического клея в точку 2 сантиметра ткани. Проникнуть от 1 до 2%лидокаин в месте разреза и основных тканей. Гидрат животного с 500 микролитров лактата звонарь одновременно.

Поместите мышь в предварительно разогретую 37 градусов по Цельсию чистой одной клетке дома. Постройте небольшое блюдо из влажных пищевых гранул в клетке, для легкого доступа к пище в последующие часы. Зарегистрируйте послеоперационный вес животного.

Зверь должен быть введен с кетопрофеном. 5 миллиграммов на килограмм одновременно после операции и в течение следующих двух дней. Убедитесь, что стимулятор tDCS полностью заряжен.

Прикрепите анодные и катодные кабели к стимулятору tDCS и сделайте их доступными рядом с местом моделирования. Прикрепите электрод контактного типа к держатель sterotaxic. Установите тепловую платформу до 37 градусов по Цельсию.

Включите кислородный поток на системе ингаляционной анестезии до 1 литра в минуту. Поместите мышь в индукционной камере анестезии. Включите испаритель изофлюрана до 3%Позвольте животному пройти изофлюрановые эффекты в течение четырех минут.

Пока животное находится в индукционной камере, используйте стерильный шприц, чтобы заполнить электрод тела 0,9% солевым раствором. Удалите животное из индукционной камеры и располагаем грудью над электродом тела. Аккуратно сдвиньте маску анестезии на нос мыши и зафиксируете на месте.

Снизить выход изофлюрана до 1,5%Заполните имплантат и электрод контактного типа солевым раствором. Аккуратно прикрепите их вместе. Отрегулируйте время стимуляции и текущую интенсивность в соответствии с вашим протоколом.

Проверить качество контакта в системе tDCS позже. Начните стимуляцию. Наблюдайте за тем, как ток нарастает в течение 20 секунд до выбранного значения.

И поддержание себя вместо установленного времени. Затем, в конце раздела ramping вниз снова. Активируйте кнопку голени для управления.

Наблюдайте за тем, как ток нарастает в течение 20 секунд до выбранного значения. А затем вниз один для остальной части периода стимуляции, с окончательным пандусом к выбранному значению, в конце, с последовательным ramped вниз. Один из разделов стимуляции завершен, тщательно перенесите животное в предварительно разогретую 37-градусную клетку по Цельсию в течение 10 минут.

Этот протокол использует tDCS для стимуляции коры головного мозга мыши на один миллиметр передней к брегме. На этом графике показаны статистика и экспрессия генов после протокола стимуляции tDCS. Использование 0,35 миллиампер текущей интенсивности в течение 10 минут в день.

Имплантат tCDS представил себя жизнеспособным с первого дня до пяти без существенной разницы между днями в контакте качества. Существуют различные протоколы стимуляции tCDS в мозге модели. Протоколы должны быть выбраны в соответствии с особенностями вашего эксперимента основывается на.

Область стимуляции, текущая интенсивность, продолжительность сеанса и позиционирование электродов. В данном конкретном протоколе, мы направлены на модуляцию моторной коры через наш известный tDCS с током 350 микроамперов в течение 10 минут. После просмотра этого видео вы сможете выполнять tDCS у мышей.

Когда кто-то практикует хирургии может занять до четырех минут на животное. Важно принимать во внимание руководящие принципы по уходу за животными при использовании мышей во время операции и после послеоперационного ухода за животными, чтобы животные остаются здоровыми во время исследования. Мы также рекомендуем ждать пять-семь дней после размещения имплантата для проведения экспериментов, так как физиологическая реакция животного на травму может помешать биологическим результатам.

Резюме

Automatically generated

Постоянного тока транскраниальной стимуляции (ЦТД) является лечебный метод предложил для лечения психических заболеваний. Животную модель имеет важное значение для понимания конкретных биологические изменения, вызываемые ЦТД. Этот протокол описывает модель мыши ЦТД, использующая хронически имплантированных электродов.

Read Article