Упрощенная модель трансплантации гетеротопного клапана сердца у грызунов

Трансплантация сердечного клапана предлагается в качестве нового типа трансплантации с потенциалом доставки прочных сердечных клапанов, способных к соматическому росту без необходимости антикоагуляции. Эта методика практична и более проста, чем предыдущие методы изучения иммунобиологии трансплантации сердечного клапана. После обезболивания крысы используйте рассекающие ножницы, чтобы разрезать кожу от мечевидной до грудинной выемки.

И выполнить стернэктомию, перерезав ребра с каждой стороны, латерально к грудине до тех пор, пока не будет достигнут оптимальный доступ к сердцу. Вводят гепарин в левое предсердие. После жертвоприношения иссечение тимуса, чтобы улучшить визуализацию больших сосудов.

Затем удаляют сердце на блоке восходящей аортой до уровня безымянной артерии. После помещения донорского сердца в стерильную чашку Петри сразу после кардиэктомии, в ледяной буфер холодного хранения, используйте щипцы и пружинные ножницы Ваннаса для рассечения сердца до тех пор, пока не останется только корень аорты с одномиллиметровой желудочковой манжетой, проксимальной к аортальному клапану. Для открытия аортального клапана сделайте продольный разрез, чтобы открыть синус Вальсальвы между левой и некоронарными пазухами, чтобы визуализировать все три листочка.

Чтобы иссечь каждый листок аортального клапана по отдельности, используйте тупые щипцы, чтобы захватить край листка, и используйте пружинные ножницы Vannas, чтобы иссечь листок, разрезая от одной комиссуры до кольцевого кольца, а затем к следующей комиссуре. Храните иссеченные листочки в буферном растворе холодного хранения до тех пор, пока они не будут готовы к имплантации крысе-реципиенту, но имплантируйте все листовки в течение четырех часов после холодного хранения. Как только крыса-реципиент будет полностью обезболена, поддерживайте температуру тела на уровне от 36 до 38 градусов по Цельсию на протяжении всей операции с помощью грелки.

Затем поместите крысу в правое боковое лежачее положение, чтобы получить доступ к левой почке. Вводят бупренорфин крысам-реципиентам подкожно перед операцией. И используйте ножницы, чтобы разрезать кожу по бокам продольно на один дюйм.

Аналогично разрезать нижележащую брюшную стенку. Используя большой и указательный пальцы, применяйте легкое давление дорсально и вентрально, используя изогнутые щипцы. Поднимите каудальный полюс почки через брюшной и кожный разрез.

Аналогичным образом экстернализуют краниальный конец почки. Альтернативно, почка может быть экстернализована путем захвата периренального жира и вытягивания вверх с легким напряжением. После экстернализации держите почки влажными с теплым физиологическим раствором, нанесенным на почку.

Чтобы создать субкапсулярный карман, начните с применения легкого давления на почечную капсулу, используя один набор тупых щипцов, чтобы почечную капсулу можно было четко отличить от нижележащей паренхимы. Одновременно используя еще один набор тупых щипцов, осторожно схватите капсулу и осторожно потяните вверх, чтобы создать отверстие в капсуле. Тупыми щипцами удлините разрез до тех пор, пока не будет создано пространство около двух миллиметров для размещения створки аортального клапана.

Развивайте неглубокий субкапсулярный карман, который немного больше, чем створка клапана, поднимая край разреза одним набором щипцов и продвигая тупой зонд под почечной капсулой. Начните трансплантацию извлеченного аортального клапана, подняв краевую фиброзную капсулу, продвигая листок аорты в субкапсулярный карман тупыми щипцами. Разрез и почечную капсулу можно оставить открытыми.

Осторожно протолкните почку обратно в ее анатомическое положение, используя контртракцию, нанесенную на края разреза. Закройте разрез брюшной полости бегущим стерильным хирургическим швом и закройте кожу скобами. После операции поместите крысу в чистую клетку на грелку с доступом к пище и воде.

При необходимости вводите Бупренорфин крысе-реципиенту каждые шесть-двенадцать часов, чтобы облегчить боль. Ежедневно контролируйте животное, чтобы оценить регулярное заживление ран и признаки боли или дистресса. И удалить скобы после семи-десяти дней операции.

Репрезентативное изображение показывает положение листка аортального клапана под почечной капсулой для реализации. И через три, семь и двадцать восемь дней внутри крысы-реципиента найти и восстановить пересаженную ткань стало легко. Листочки аортального клапана сохранили свою родную архитектуру после гетеротопной трансплантации у сингенных животных.

Демонстрация полезности этой модели в качестве базового уровня для сравнения иммунного ответа при аллергенных трансплантациях. Гистология с окрашиванием гематоксилином и эозином показала, что клапанные листочки в сингенных трансплантатах через семь дней были структурно неповрежденными без признаков отечного отека. Структурная целостность створки клапана после трансплантации была дополнительно подтверждена иммуногистохимией для актина гладких мышц и CD31.

Створки аортального клапана очень деликатные. Важно обращаться с ними очень осторожно, не повреждая клапаны. Почечная субкапсулярная трансплантация сердечного клапана упрощает гетеротопную трансплантацию сердечного клапана.

Это позволит исследователям с ограниченными микрохирургическими возможностями исследовать иммунобиологию трансплантации сердечного клапана.