Rectal Organoid Morphology Analysis (ROMA): A Diagnostic Assay in Cystic Fibrosis

Senne Cuyx; Anabela S. Ramalho; Nikky Corthout; Steffen Fieuws; Eva F&#252;rstov&#225;; Kaline Arnauts; Marc Ferrante; Catherine Verfaillie; Sebastian Munck; Mieke Boon; Marijke Proesmans; Lieven Dupont; Kris De Boeck; Fran&#231;ois Vermeulen

doi:10.3791/63818

Анализ морфологии органоидов прямой кишки (ROMA): диагностический анализ при муковисцидозе

JoVE Journal
Medicine

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Medicine

Rectal Organoid Morphology Analysis (ROMA): A Diagnostic Assay in Cystic Fibrosis

Анализ морфологии органоидов прямой кишки (ROMA): диагностический анализ при муковисцидозе

Full Text

3,300 Views

07:56 min

June 10, 2022

DOI: 10.3791/63818-v

Senne Cuyx^1,2, Anabela S. Ramalho¹, Nikky Corthout^3,4, Steffen Fieuws⁵, Eva Fürstová⁶, Kaline Arnauts^7,8, Marc Ferrante^7,9, Catherine Verfaillie⁸, Sebastian Munck^3,4, Mieke Boon^1,2, Marijke Proesmans^1,2, Lieven Dupont^10,11, Kris De Boeck^1,2, François Vermeulen^1,2

¹Department of Development and Regeneration, Woman and Child Unit, CF research lab,KU Leuven, ²Department of Pediatrics, Pediatric Pulmonology,University Hospitals Leuven, ³VIB Bio Imaging Core,VIB-KU Leuven Center for Brain & Disease Research, ⁴Department for Neuroscience,KU Leuven, ⁵Interuniversity Center for Biostatistics and Statistical Bioinformatics,University of Leuven and University of Hasselt, ⁶Department of Pediatrics, 2^nd Faculty of Medicine,Charles University and Motol University Hospital, ⁷Department of Chronic Diseases and Metabolism (CHROMETA), Translational Research Center for Gastrointestinal Disorders (TARGID),KU Leuven, ⁸Department of Development and Regeneration, Stem Cell Institute Leuven (SCIL),KU Leuven, ⁹Department of Gastroenterology and Hepatology,University Hospitals Leuven, KU Leuven, ¹⁰Department of Chronic Diseases, Metabolism and Ageing; Pneumology,KU Leuven, ¹¹Department of Respiratory Diseases,University Hospitals Leuven

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Этот протокол описывает анализ морфологии ректальных органоидов (ROMA), новый диагностический анализ муковисцидоза (МВ). Морфологические характеристики, а именно округлость (индекс циркулярности, CI) и наличие светового потока (коэффициент интенсивности, IR), являются мерой функции CFTR. Анализ 189 испытуемых показал идеальную дискриминацию между муковисцидозом и без муковисцидоза.

ROMA может различать органоиды от субъектов с муковисцидозом и без него, когда обнаружено менее двух болезнетворных мутаций CFTR и когда фторид пота является промежуточным. ROMA может быть выполнен в любом возрасте и с низкой частотой осложнений. Анализ является полуавтоматизированным и стандартизированным, и биопсия может быть отправлена в центральную лабораторию для анализа.

Органоиды, используемые для ROMA, также могут быть использованы для доступа к модуляторной эффективности CFTR, а ROMA может помочь в измерении степени восстановления функции CFTR. Через сутки после нанесения покрытия окрасьте органоиды кальциевым зеленым цветом. Поверните и слегка наклоните пластину с крышкой на несколько раз, чтобы обеспечить равномерное распределение кальциевого зеленого во всей лунке.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos