Выделение дермальных лимфатических эндотелиальных клеток мыши
21 июля 2023 г.
В данной работе описан метод выделения эндотелиальных клеток мышей из дермальных лимфатических капилляров с помощью магнитных шариков. Выделенные лимфатические эндотелиальные клетки могут быть использованы для последующих экспериментов in vitro и анализа экспрессии белков.
Исследования нашей группы сосредоточены на выявлении механизмов, регулирующих физиологию эндотелиальных клеток. Этот протокол описывает метод выделения эндотелиальных клеток почек с помощью магнитных шариков, в частности, из термических лимфатических капилляров в помещениях, где сортировка клеток, активируемых флуоресценцией, недоступна. Протокол позволяет выделить лимфатические эндотелиальные клетки из трансгенных мышей для изучения их физиологии in vitro.
Он особенно подходит в тех случаях, когда чистота лимфатических эндотелиальных клеток может быть нарушена при последующем применении. Этот процесс обеспечивает высокий выход лимфатических эндотелиальных клеток, получаемых из лимфатических капилляров, а не из других собирательных сосудов. Это также хорошая альтернатива в случае отсутствия возможностей сортировки клеток.
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео
Обзор
В данном исследовании представлен протокол выделения лимфатических эндотелиальных клеток из дермы мыши с использованием магнитных бусин, который может быть применен для физиологических исследований in vitro. Этот метод особенно полезен в ситуациях, когда сортировка клеток с помощью флуоресцентно-активированного клеточного сортера недоступна, и позволяет добиться высокого выхода данных клеток.
Основные компоненты исследования
Область исследований
- Физиология эндотелиальных клеток
- Методы изоляции клеток
- Эксперименты in vitro
Теоретические сведения
- Значение лимфатических эндотелиальных клеток в биологических исследованиях
- Трудности при выделении чистых популяций клеток
- Применение в изучении функций эндотелиальных клеток
Используемые методы
- Изоляция на основе магнитных частиц
- Мышиная модель
- Методы культивирования клеток и приготовление сред
Основные результаты
- Успешное выделение лимфатических эндотелиальных клеток с высокой степенью чистоты
- Подтвержденное наличие LYVE1-положительных клеток после выделения
- Культивирование in vitro, демонстрирующее пригодность для дальнейших исследований
Выводы
- Данный метод эффективно улучшает выделение лимфатических эндотелиальных клеток мыши для физиологических исследований.
- Этот протокол предлагает исследователям жизнеспособную альтернативу традиционным методам сортировки.
Часто задаваемые вопросы
Значимость для промышленности
Эффективное выделение дермальных лимфатических эндотелиальных клеток (DLECs) мыши позволяет проводить механистические исследования функций лимфатической системы и специфической роли генов в системах, имеющих значение для изучения заболеваний. Данный протокол способствует валидации мишеней и исследованию сигнальных путей на ранних этапах поиска, особенно в условиях отсутствия современной инфраструктуры для сортинга клеток. Этот подход повышает прогностическую достоверность трансляционных исследований и эффективность отбора проектов в области биологии лимфатической системы.
Стратегическое применение в биофармацевтических исследованиях и разработках
Первичный поиск и валидация мишени
- Обеспечивает функциональный анализ ген-специфических эффектов в лимфатических эндотелиальных клетках.
- Способствует снижению биологических рисков за счет выделения чистых DLECs для механистических исследований.
- Облегчает уточнение путей передачи сигнала с использованием трансгенных моделей и технологии Cre-lox.
- Повышает прогностическую достоверность при выборе мишеней в исследованиях лимфатической системы.
Скрининг и разработка анализа
- Обеспечивает получение валидированных популяций первичных клеток для последующих анализов in vitro.
- Стандартизирует изоляцию клеток для получения воспроизводимых и количественных результатов экспериментов.
- Позволяет разрабатывать методы анализа в лабораториях, не оснащенных системой сортинга клеток с флуоресцентной активацией.
- Обеспечивает надежную оценку экспрессии генов и функций белков в DLECs.
Трансляционные и доклинические исследования
- Соответствует моделям, релевантным конкретным заболеваниям, для изучения физиологии и патофизиологии лимфатической системы.
- Обеспечивает непрерывность процесса от генетических манипуляций до функциональной валидации в доклинических условиях.
- Снижает трансляционный риск, позволяя проводить механистические исследования ex vivo и in vitro.
Интеграция конвейера и рабочего процесса
Данный метод выделения на основе магнитных бусин применим на всех этапах — от ранних открытий до доклинических исследований, обеспечивая поддержку как фундаментальным исследованиям, основанным на гипотезах, так и трансляционной валидации.
- Фундаментальная биология: способствует проверке гипотез и снижению рисков при изучении механизмов в лимфатических эндотелиальных системах.
- Скрининг: обеспечивает получение воспроизводимых количественных популяций клеток для подготовки анализов и последующих рабочих процессов.
- Аналитика: позволяет измерять уровни экспрессии генов и белков в изолированных DLECs.
- Трансляционные исследования: служит связующим звеном между генетическими манипуляциями и функциональной оценкой в моделях, релевантных для конкретных заболеваний.
- Корпоративное повторное использование: предлагает стандартизированный масштабируемый протокол, который можно адаптировать для различных моделей мышей и исследовательских групп.
Операционное и корпоративное влияние
- Научная ценность: Повышает прогностическую достоверность и снижает механистическую неопределенность в исследованиях лимфатической системы.
- Операционная ценность: Стандартизирует изоляцию клеток для обеспечения воспроизводимости и масштабируемости исследований.
- Стратегическая ценность: Оптимизирует принятие решений о продолжении или прекращении разработки (go/no-go) и эффективность использования капитала за счет надежной валидации мишеней.
- Влияние на портфель: Поддерживает приоритезацию с учетом рисков и продвижение программ, связанных с лимфатической системой.
Особенности реализации
- Требуется опыт в области диссекции мышей и методов первичного культивирования клеток.
- Необходим доступ к оборудованию для очистки с помощью магнитных бусин и базовой инфраструктуре для визуализации.
- Требуется стандартизация между исследовательскими группами для обеспечения воспроизводимости анализа экспрессии генов.
- Метод применим к различным трансгенным моделям мышей с использованием лимфатически-специфических промоторов.
- Возможное ограничение — отсутствие в некоторых учреждениях оборудования для сортировки клеток с помощью флуоресцентно-активированной сортировки.
