Разработка доклинической ингаляционной модели для тестирования испаренных дистиллятов каннабиса

Мы исследуем, как вдыхаемые вейп-продукты каннабиса влияют на физиологию легких, сочетая традиционные методы молекулярной биологии и новые вычислительные методы, чтобы получить представление о том, как вейпинг изменяет функцию легких. Мы показали, что пары каннабиса вызывают транскрипционные изменения в эпителиальных клетках легких, подобно дыму каннабиса, что указывает на повреждение. Кроме того, появляются механистические представления о повреждении легких, связанном с вейпингом, особенно в продуктах ТГК, содержащих ацетат витамина Е. Большинство исследований продуктов, содержащих ТГК, основаны на неингаляционных методах, таких как пероральный зонд и инъекции, которые дают ценную информацию, но отличаются от типичного использования человеком. Наша цель состоит в том, чтобы смоделировать воздействие каннабиса более физиологически значимым образом, при вдыхании. Эффективность новых продуктов каннабиса создает проблемы с дозировкой. Мы хотим имитировать модели использования человеком и достичь физиологически значимых доз без побочных эффектов у мышей. Мы устанавливаем стандартизированную дозу воздействия, которая доставляет физиологически значимые дозы ТГК мышам без побочных эффектов на поведение.

[Инструктор] Для начала соберите все компоненты системы. Вставьте закрытую трубку в буферную камеру насоса для затяжки, чтобы предотвратить утечку. Включите систему и запустите программное обеспечение. Выберите модуль сеансов экспериментирования. Выберите новое исследование, чтобы начать новую экспериментальную сессию. Определите экспериментальные группы и испытуемых, подлежащих изучению. Затем выберите экспериментальный шаблон, который соответствует желаемому режиму воздействия. В окне свойств сеанса заполните раздел оператора, чтобы задокументировать использование оборудования. Для калибровки выберите нужный канал в программном обеспечении. Следуйте инструкциям, описанным в операционном программном обеспечении. Далее выберите нужный насос в программном обеспечении. Выполните тест потока системы, следуя инструкциям по эксплуатации программного обеспечения. Убедитесь, что поток направлен на ротаметр. Отмените все запросы на начало записи данных, если эксперимент еще не готов к началу. Для подготовки животных самца и самку C57 BL6 акклиматизируют постепенно в течение трех суток к системе воздействия. Чтобы начать акклиматизацию, поместите каждую мышь в мягкое удерживающее устройство. Инициируйте смещение воздушного потока со скоростью два литра в минуту с помощью комнатного воздуха в течение времени, эквивалентного их экспериментальному воздействию 10, 20 или 30 минут. Полностью втяните сетчатый компонент ограничителя. Затем удерживайте всю фиксацию перед мышью, и позвольте мыши самостоятельно войти в компонент поршня. Убедитесь, что нос мыши виден в области поршня. Закрепите зажим для крепления сразу за мышью, чтобы предотвратить движение назад. При работе с мышами разного пола или генотипа используйте связующие зажимы с цветовой кодировкой, чтобы идентифицировать и различать их. Поместите шесть ограниченных мышей в башню системы, предназначенную только для носа. Начните подачу смещения со скоростью два литра в минуту с помощью комнатного воздуха, чтобы обеспечить достаточный поток воздуха через камеру. В окне настройки задач щелкните правой кнопкой мыши по созданному профилю электронной сигареты и выберите свойства задачи. В поле «Частота затяжки» введите требуемый интервал затяжки, например 30 секунд для режима двух затяжек в минуту. Нажмите кнопку «ОК» при появлении запроса на подтверждение изменений. Следуйте подсказкам в конце сеанса, чтобы сохранить режим затяжки в качестве шаблона для дальнейшего использования. Когда вы будете готовы начать воздействие, дважды щелкните по измененному профилю электронной сигареты, чтобы запустить ее. Одновременно запустите таймер, чтобы отслеживать продолжительность экспозиции. Тестируйте различную интенсивность, поддерживая 10-минутную выдержку и увеличивая частоту затяжек до одной, двух и четырех затяжек в минуту. После окончания экспозиции возобновите поток смещения с помощью комнатного воздуха. Чтобы освободить животных от фиксаторов, сначала снимите зажим для связывания. Полностью втяните сетку в сторону поршня и позвольте животному самостоятельно выйти из ограничителя. При необходимости осторожно потяните за хвост, чтобы стимулировать движение назад. Концентрации ТГК-СООН в сыворотке крови значительно увеличивались в зависимости от времени при 10, 20 и 30 минутах воздействия паров ТГК с одной затяжкой в минуту. Увеличение частоты затяжек в течение 10-минутного воздействия приводило к дозозависимому повышению уровня ТГК-СООН в сыворотке крови на один, два и четыре затяжки в минуту. Мыши, подвергшиеся воздействию паров ТГК в течение 10 минут с двумя затяжками в минуту и четырьмя затяжками в минуту, продемонстрировали значительную гиполокомоцию, при этом пройденное расстояние сократилось до 0,29 и 0,05 метра соответственно.