Ортотопическая трансплантация левого легкого у крыс

Мое исследование было сосредоточено на разработке стандартизированной, воспроизводимой модели трансплантации левого легкого для изучения посттрансплантационных осложнений, особенно хронического отторжения, и для лучшего понимания механизма, приводящего к долгосрочному отторжению трансплантата. Наш протокол обеспечивает более короткую кривую обучения, единую операционную возможность и более высокую воспроизводимость по сравнению с существующими методами. Наша стандартизированная модель прямой трансплантации легких обеспечивает надежную платформу для изучения осложнений после трансплантации легких и может ускорить трансляционные исследования для улучшения выживаемости трансплантата.

В будущем наша лаборатория сосредоточится на изучении хронического отторжения после трансплантации легких с целью улучшения долгосрочной выживаемости реципиентов трансплантата легких. Для начала приобретите внутривенные катетеры и лезвия 14 и 16 калибра. Обрежьте катетеры в манжету с хвостиком с лезвием.

Затем разделите каждую манжету на тело и хвост, каждый примерно два-три миллиметра в длину. С помощью скальпеля создайте поверхностные царапины на корпусе манжеты, чтобы увеличить трение для фиксации швов. Чтобы извлечь донорское легкое, отведите язык крысы под наркозом наружу и вверх с помощью щипцов.

Расположите хирургическую лампу спереди от шеи, чтобы четко освещать гортанное отверстие. Теперь введите внутривенную канюлю 14-го калибра в дыхательные пути через голосовую щель. Установите вентилятор в режим управления давлением.

Затем введите параметры веса, отрегулируйте давление до 15 сантиметров воды, и подключите аппарат ИВЛ. Наблюдайте за подъемом и опусканием грудной клетки, чтобы обеспечить синхронизацию с частотой работы аппарата ИВЛ. Далее зафиксируйте конечности и голову с помощью скотча или ограничителей.

Сделайте разрез по средней линии вдоль брюшной стенки. Введите гепарин через обнаженную брюшинную вену, затем дайте системному кровообращению в течение трех минут, чтобы обеспечить полную гепаринизацию. Разрежьте диафрагму и откройте грудную полость от средней линии грудины.

Затем зафиксируйте грудную стенку с обеих сторон с помощью гемостатика. Удаляют вилочковую железу, чтобы обнажить органы грудной полости. Последовательно разрежьте верхнюю полую вену, нижнюю полую вену, а также левую и правую ушные раковины.

Теперь введите холодный физиологический раствор в корень легочной артерии с помощью 20-миллилитрового шприца в течение одной минуты для перфузии под низким давлением до тех пор, пока донорское легкое не станет полностью белым. Разрежьте ткани, соединяющие донорское легкое, и извлеките донорское сердце и легкое в блоке. Замочите донорскую блокаду сердца и легких в предварительно охлажденном физрастворе.

Расположите блок искусственного кровообращения на льду под микроскопом. Обхватите трахею кровоостанавливающим средством и закрепите его в пластилине. Накройте легкие влажной стерильной бумагой для линз.

Теперь с помощью щипцов разделите легочную артерию, бронх и легочную вену под микроскопом. Перевязать бронх близко к легкому с помощью хирургических швов 6-0. С помощью пружинных ножниц разрежьте легочную артерию, бронхи и легочную вену.

Извлеките легочную артерию, бронх и легочную вену из соответствующих манжет, изготовленных из катетеров 16, 14 и 16 калибра. Закрепите стенки трубки на манжете с помощью 8-0 хирургические швы. Сохраните донорские легкие в физрастворе и поместите их обратно на лед до имплантации.

Депилируют левую торакодорсальную область животного-реципиента. Расположите животное в правой боковой позе пролежня на термостатическом операционном столе. Теперь сделайте разрез через кожу и грудную стенку в точке апикального импульса в четвертом межреберье, чтобы получить доступ к грудной полости.

Используйте ретрактор для век, чтобы открыть грудную полость. Затем аккуратно отодвиньте левое легкое в сторону с помощью влажного ватного тампона, чтобы обнажить и резко пересечь нижнюю легочную связку. Далее обхватите левое легкое щипцами и втяните его за пределы грудной полости.

Закрепите ворота гемостатом, затем стабилизируйте его пластилином. Теперь рассеките легочные ворота, чтобы разделить легочную артерию, легочную вену и бронх. Зажмите проксимальные концы легочной артерии, легочной вены и бронха с помощью сосудистых зажимов.

Предварительно перевяжите легочную артерию, бронх и легочную вену реципиента с 8-0 хирургические швы для быстрого анастомоза. Обрежьте платформу на зажатом левом легком реципиента, чтобы облегчить установку донорского легкого. Сделайте небольшие разрезы на дистальных концах легочной артерии, легочной вены и бронха.

Промойте легочную артерию и легочную вену гепаринизированным физиологическим раствором, чтобы предотвратить образование тромбов. Затем возьмите донорское легкое изо льда и расположите его на подготовленной платформе левого легкого реципиента. С помощью щипцов приподнимайте одну сторону отверстия для разреза, затем последовательно имплантируйте и перевязайте манжеты легочной артерии, легочной вены и бронха реципиенту.

Откройте микрогемостатический зажим и наблюдайте, как донорское легкое меняет цвет с белого на красный. Осмотрите участки анастомоза на наличие признаков кровотечения. Теперь удалите левое легкое реципиента и верните донорское легкое в грудную полость.

Насухо протрите грудную полость стерильной ватой. Затем послойно закройте грудную полость. Дождитесь самостоятельного восстановления дыхания, прежде чем отключать аппарат искусственной вентиляции легких.

Через час получатели могли свободно есть. Через шесть месяцев после трансплантации компьютерная томография показала, что вентиляция трансплантированных легких была сопоставима с фиктивной группой, что указывает на сохраненную функцию легких. Макроскопический вид легких не отличался заметно между фиктивной и трансплантированной группами, не проявляя признаков ухудшения или аномалии.

Окрашивание легочных тканей гематоксилином и эозином не выявило существенных патологических изменений в трансплантированных легких по сравнению с фиктивной группой, с сохранением альвеолярных структур и отсутствием воспалительной инфильтрации.