Neste protocolo, demonstramos como fabricar e tetrodes condição para uso com uma matriz de micro-drive, que foi projetada para gravações eletrofisiológicas crônica em ratos. Além disso, ilustram as fases finais do micro-drive de construção da matriz, que inclui a instalação de fios de aterramento e um cone de proteção.
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Artigo de método
Micro-drive Array para Crônica In vivo: Assembléia Tetrodo
Neste artigo
Resumo
Resumo
O tetrode, um pacote de quatro eletrodos, tem provado ser uma ferramenta valiosa para a gravação simultânea de múltiplos neurônios in-vivo. A amplitude diferencial de assinaturas do potencial de ação sobre os canais de um tetrode permite o isolamento da unidade única atividade da unidade de multi-sinais. A capacidade de controlar com precisão a localização estereotáxica e profundidade do tetrode é fundamental para estudar a atividade neural coordenada em todas as regiões do cérebro. Em combinação com uma matriz de unidade micro-, é possível alcançar posicionamento preciso e estável de controle tetrodes muitos ao longo de dias ou semanas. Neste protocolo, demonstramos como fabricar e tetrodes condição usando ferramentas básicas e materiais, instalar o tetrodes em uma matriz tetrode multi-disco para doenças crônicas in vivo de gravação no rato, fazer conexões fio terra para a matriz de micro-drive, e anexar um cone de proteção em série na unidade de micro-, a fim de proteger a tetrodes do contato físico com o meio ambiente.
Protocolo
1. Fabricação de tetrodes
- Iniciar a construção de um tetrode pela obtenção de um 50 cm de comprimento, poliimida isolado, ni-cromo fio com um núcleo de diâmetro 12,5 micra. Dobre o arame ao meio. Correr os dedos ao longo do par para fazê-los ficarem juntos. Verifique se o par de fios de ter um bom contato durante toda a sua extensão.
- Dobre a par de novo, segurando as duas pontas. Certifique-se que o laço formado em uma extremidade não está dobrada. Corte a quatro fios na extremidade não-looped para que os quatro dicas são alinhados.
- Para a próxima etapa, você vai precisar de um jacaré modificado, um dispositivo de giro motorizado, e uma....
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Discussão
Este protocolo é a segunda parcela de um protocolo de duas partes: "Micro drive-matriz para crônica in vivo de gravação." A combinação da unidade de micro-array e tetrode é uma ferramenta poderosa para a obtenção de gravações simultâneas de muitos neurônios em uma vigília, comportando a preparação animal. Esperançosamente, nós fornecemos-lhe com todas as informações necessárias para que você vai precisar para começar ou melhorar gravações eletrofisiológicas em seu próprio laboratório.
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Agradecimentos
Gostaríamos de agradecer junho Yamamoto por sua concepção e construção do, motorizado automático tetrode dispositivo twister retratado no vídeo. Além disso, gostaríamos de agradecer todos os membros Lab passado e do presente Wilson por suas contribuições para micro-drive e desenvolvimento tetrode tecnologia no laboratório.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários | |
|---|---|---|---|---|
| Panavise | Ferramenta | Panavise | Modelo 301 | Segura o conjunto de microdispositivo ou tesoura serrilhada |
| Alicate Xcelite 378M Modificado | Ferramenta | Newark Inc | 96F8903 | Para inserir os pinos da placa conectora. Para fabricar, remover 2 mm de uma das pontas do alicate. |
| Cola de Curagem Lenta | Material | Great Planes (Champaign, IL) | GPMR6015 | Para colar o tetrodo ao microdispositivo |
| Solução de Banho de Ouro | Material | Neuralynx Inc. | Sifco Selectron Gold NC | Contém partículas de ouro para eletrodeposição |
| Gerador de Corrente | Ferramenta | World Precision Instruments, Inc. | A365D-B | Também conhecido como Isolador de Estímulo. Usado para eletrodepositar a solução de ouro nas pontas dos eletrodos. |
| Medidor de Impedância | Ferramenta | BAK Electronics | IMP-1 / 6662 / 2788 | Para verificar a impedância dos eletrodos |
| Secador de Ar Quente | Ferramenta | Steinel (Alemanha) | HG 3002 LCD | Para fundir os eletrodos juntos e formar o tetrodo |
| Pinceta Accu-Tek Carbofib com Ponta | Ferramenta | Aven | 18768 (Padrão 304) | Para manipular tetrodos |
| Clipes de Jacaré | Ferramenta | Fine Science Tools | 18050-35 | Também conhecido como serrefina tipo "bulldog". Para prender os tetrodos juntos durante a torção |
| Tesoura de Dissecação Microcirúrgica | Ferramenta | Biomedical Research Instruments | 25-1000 | Para cortes gerais de fios de tetrodo/eletrodo |
| Tesoura Serrilhada Iris Toughcut | Ferramenta | Fine Science Tools | 14058-09 | Para o corte final dos tetrodos |
| Fio de Aço Inoxidável Revestido com Teflon | Material | A-M Systems | 790500 | Fio de terra |
| Fio de níquel-cromo de 12,5 mícrons | Material | Kanthal Palm Coast | Rediohm-800 1/4 HARD PAC COATING | Fio microscópico revestido com poliimida para fabricação de tetrodos. |
| Twister de Tetrodo | Ferramenta | Neuralynx Inc. | Estação de Montagem de Tetrodos | Aumenta a velocidade e a consistência da fabricação de tetrodos. |
| Tinta de Prata | Material | GC International | 22-023 | Para conectar os fios microeletrodos do tetrodo aos pinos do conector (ver Discussão) |
| Empunhadura de Estilete X-Acto | Material | MSC Direct | X3001 | Para construir um dispositivo de fixação do microdispositivo. |
| Conector de 26 pinos, 2 fileiras | Material | Mill-Max | 852-10-026-30-001000 | Para construir um dispositivo de fixação do microdispositivo. |
Referências
- Gray, C. M., Maldonado, P. E., Wilson, M., McNaughton, B. Tetrodes markedly improve the reliability and yield of multiple single-unit isolation from multi-unit recordings in cat striate cortex. J. Neurosci. Methods. 63 (1-2), 43-54 (1995).
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Reimpressões e permissões
