Neste artigo apresentamos um protocolo geral para medir a expectativa de vida dos nematóides mantidos em meios sólidos com alimentos UV-morto bacteriana.
O envelhecimento é um processo degenerativo caracterizado por uma deterioração progressiva de componentes celulares e organelas, resultando em mortalidade. O nematóide<em> Caenorhabditis elegans</em> Surgiu como um modelo principal utilizado para estudar a biologia do envelhecimento. Porque praticamente todos os subsistemas biológico sofre declínio funcional com o aumento da idade, expectativa de vida é o objetivo primário de interesse quando se considera taxa total de envelhecimento. Em nematóides, expectativa de vida é normalmente definida como o número de dias de um animal continua a responder a estímulos externos. Nematóides podem ser propagadas tanto em meios líquidos ou em meios sólidos em placas, e as técnicas foram desenvolvidas para medir o tempo de vida em ambas as condições. Aqui apresentamos um protocolo generalizada para medir tempo de vida dos nematóides mantidos em meio de crescimento sólido de nematóides e alimentados com uma dieta de UV-morto bactérias. Estes procedimentos podem ser facilmente adaptado a vida útil do ensaio sob várias condições comuns, incluindo uma dieta composta de bactérias vivas, a restrição alimentar e interferência de RNA.
O controle genético da longevidade tem sido estudado extensivamente em C. elegans, em grande parte devido à facilidade e rapidez com que expectativa de vida pode ser determinada. O protocolo discutido neste artigo descreve uma estrutura básica para a obtenção de dados de vida reprodutíveis extensão em C. elegans e também pode ser aplicado às espécies relatednematode. 2 Ao fazer algumas alterações simples desses procedimentos pode ser adaptado para medir a expectativa de vida sob …
Este trabalho foi financiado por um Avanços Glenn / AFAR em Gerontologia e Grant Award NIH 1R01AG031108-01 a MKGS é suportado pelo NIH treinamento conceder P30AG013280. MK é um Ellison Medical Foundation Scholar novo no Envelhecimento.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
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Agar | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0145-17-0 (214530) | |
Ampicillin | Reagent | MidSci | 0339 | |
BactoTryptone | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0123-17-3 (211705) | |
BactoPeptone | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0118-17-0 (211677) | |
CaCl2 | Reagent | Fisher Scientific (JT Baker) | NC9699248 (1332-01) | |
Carbenicillin | Reagent | Gold BioTechnology (GBT) | C0109 | |
Cholesterol | Reagent | Sigma-Aldrich | C75209 | |
Fluorodeoxyuridine (FUDR) | Reagent | Sigma-Aldrich | F0503 | |
Isopropyl β-d-Thiogalactopyranoside (IPTG) | Reagent | Gold BioTechnology (GBT) | I2481C5 | |
KPi Dibasic | Reagent | Fisher Scientific (JT Baker) | 5087862 (3252-01) | |
KPi Monobasic | Reagent | Fisher Scientific (JT Baker) | 5087861 (3246-01) | |
MgSO4 | Reagent | Fisher Scientific (JT Baker) | NC9561800 (2500-01) | |
NaCl | Reagent | Fisher Scientific | S251 | |
Tris | Reagent | Sigma-Aldrich | T1503 | |
Yeast Extract | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0886-17-0 (288620) |