Qui descriviamo un protocollo per esaminare la migrazione delle cellule gliali in un occhio lo sviluppo di Drosophila mediante l'analisi microscopica vivono in coppia con tag GFP cellule gliali.
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Articolo metodologico
Vivere Imaging della migrazione cellule gliali nella Eye Disco Drosophila immaginale
In questo articolo
Sommario
Abstract
Cellule gliali di entrambi gli organismi vertebrati e invertebrati devono migrare verso le regioni obiettivo finale per ensheath e supportare i neuroni associati. Anche se i recenti progressi sono stati fatti per descrivere la migrazione live delle cellule gliali nell'ala sviluppo pupale (1), gli studi di
Protocollo
Parte 1: Pre-set-up sperimentale.
- Una settimana di anticipo, compagno vola a generare larva che esprimono GFP sotto il controllo di un gliali specifico promotore. Per il nostro esperimento abbiamo visualizzato GFP taggati con una sequenza di localizzazione nucleare espressi nelle cellule gliali con la polarità invertita (pronti contro termine) promotore (3, 4).
- Preparare copertura scivola almeno un giorno di anticipo da una immersione 18 millimetri coprioggetto tondo per 10 minuti in 1% di poli-L-lisina soluzione e aria secca durante la notte.
- Il giorno prima dell'esperimento, pulire una camera Chamlide cultura magnetico im....
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Discussione
In questo protocollo si descrivono osservazione della migrazione delle cellule gliali nel disco occhio immaginale usando la microscopia dal vivo. Nel nostro esempio wild-type (figura 1 dC), abbiamo utilizzato un marcatore nucleare GFP per osservare il movimento delle cellule gliali nel disco occhio nel corso di un'ora. In un mutante di un gene candidato necessaria per la migrazione delle cellule gliali attualmente allo studio nel nostro laboratorio, abbiamo osservato uno stallo dei nuclei delle cellule glia.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da dichiarare.
Ringraziamenti
Patrick Cafferty è supportato da una borsa di studio post-dottorato dalla Multiple Sclerosis Society of Canada.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti | |
|---|---|---|---|---|
| Poli-L-lisina | Reagente | Sigma-Aldrich | P8920 | |
| Mezzo per insetti di Schneider’s | Reagente | Sigma-Aldrich | S0146 | |
| Penicillina-Streptomicina | Reagente | Sigma-Aldrich | P4458 | |
| Soluzione di insulina da pancreas bovino | Reagente | Sigma-Aldrich | I0516 | |
| Camera magnetica Chamlide | Strumento | Live cell Instrument | CM-R-10 | Camera tipo piastra da 35 mm per coprislip da 18 mm |
| Forbici da trinciatura ultrafini | Strumento | Fine Science Tools | 15200-00 | |
| Pinzette Dumont n. 5 | Strumento | Fine Science Tools | 11251-20 | |
| Microscopio a fluorescenza | Microscopio | Carl Zeiss, Inc. | Qualsiasi sistema di imaging a fluorescenza dotato dei filtri e dell'eccitazione necessari per GFP può essere utilizzato. |
Riferimenti
- Aigouy, B., Lepelletier, L., Giangrande, A. Glial chain migration requires pioneer cells. J. Neurosci. 28, 11635-11641 (2008).
- Silies, M., Yuva, Y., Engelen, D., Aho, A., Stork, T., Klambt, C. Glial cell migration in the eye disc. J. Neurosci. 27, 13130-13139 (2007).
- Brand, A. H., Perrimon, N.
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Ristampe e permessi
